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实验四PCR基因扩增

实验四PCR基因扩增

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实验目的

实验目的

l通过本实验学习PCR反响的根本原理与

实验技术。

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实验原理

实验原理

l聚合酶链式反响(polymerasechain

reaction,PCR)，是一种在体外快速扩增

特定基因或DNA序列的方法，故又称为基

因的体外扩增法。

l在待扩增的DNA片断两侧和与其两侧互补

的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和

延伸假设干个循环后，DNA扩增2n倍。

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PCR技术的原理

PCR技术的原理

l1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋

的氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。

l2.退火：是模板与引物的复性。引物是与模板

某区序列互补的一小段DNA片段。

l3.延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出

发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按

5’→3’的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。

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靶DNA的扩增

靶DNA的扩增

5’3’

5’3’

(a)

(a)

5’3’

引物25’3’

引物2

(b)

(b)3’5’

3’5’引物1

引物1

5’

5’3’

3’

引物2互补链引物1互补链

引物互补链引物互补链

(c)21

(c)

3’5’

3’5’

3’

3’5’

(d)5’

(d)

新引物

新引物

5’3