实验六目的基因的PCR扩增.pdf

实验六目的基因的PCR扩增

精选ppt

精选ppt

一、实验目的

一、实验目的

通过本实验学习PCR反响的根本原理，掌握

PCR的根本操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术。

精选ppt

精选ppt

二、实验原理

二、实验原理

PCR〔polymerasechainreaction)：

聚合酶链式反响，又称体外DNA扩增

技术。

是一种体外扩增特异DNA片段的技术。

精选ppt

精选ppt

二、实验原理

二、实验原理

PCR用于扩增位于两端序列之间的DNA区

段，即通过引物延伸而进行的重复双向DNA合成。

根本原理及过程如下：

PCR循环过程中有三种不同的事件发生：〔

1〕模板变性

〔2〕引物退火

〔3〕热稳定DNA聚合酶进DNA延伸合成。

精选ppt

精选ppt

二、实验原理

二、实验原理

1、变性：加热使模板DNA在高温下〔94-95℃〕变性，双

链间的氢键断裂而形成两条单链，即变性阶段。

2、退火：在体系温度降至37-65℃，模板DNA与引物按碱基

配对原那么互补结合，使引物与模板链3’端结合，形成局

部

双链DNA，即退火阶段。

3、延伸：体系反响温度升至中温72℃，耐热DNA聚合酶以单

链DNA为模板，在引物的引导下，利用反响混合物中的4

种脱氧核苷三磷酸〔dNTP〕，按5’到3’方向复制出互补

DNA，即引物的延伸阶段。

精选ppt

精选ppt

5’3’

模板3’5’

高温变性

引物对

低温退火

中温延伸

不断循环

目的片段

聚合酶链式反应示意图

精选ppt

精选ppt

二、实验原理

二、实验原理

上述3步为一个循环，即高温变性、低温退火、

中温延伸3个阶段。从理论上讲，每经过一个循环，

样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为

新一轮循环的模板，经过25～30个循环后DNA可扩增

106～109倍。

典型的PCR反响体系由如下组分组成：DNA模

板、反响缓冲液、dNTP、MgCl2、两条合成的DNA

引物、耐热DNATaq聚合酶。

精选ppt

精选ppt

二、实验原理

二、实验原理