动物细胞融合和单克隆抗体的制备课件解析.ppt

教学目标 了解动物细胞融合的原理、过程和意义。 理解单克隆抗体制备的过程和应用 问题探讨 B淋巴细胞与抗体的关系： 单克隆抗体的概念： 用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒” 在受精后不久，胎盘滋养层细胞就会分泌人绒毛膜促性腺激素，是由受孕妇女体内胎盘产生的一种糖蛋白类激素，在孕妇的尿液中大量存在。而在非妊娠女尿液中几乎不含有。 ①诊断试剂（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等） 单克隆抗体的应用 优点：准确、高效、简易、快速 ②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运载药物，如 “生物导弹”） 返 回 第三节动物细胞工程的应用 1.教学重点： 单克隆抗体的制备和应用 2.教学难点： 单克隆抗体的制备过程 重点难点 “番茄—马铃薯”（理想图） 通过长期的实验，科学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄—马铃薯”植株。 如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？ 动物细胞也能融合吗？ 思考下列问题： 1、什么叫动物细胞融合？植物体杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢？ 2、动物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？ 一、动物细胞融合 一、细胞融合 1、概念： 一定条件下两个或多个细胞融合成一个细胞的过程。 2、结果： 形成单核的杂交细胞 3、原理： 膜的流动性 4、促融法 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG 生物法：灭活的病毒（仙台病毒等） （丧失感染活性、保留融合活性） 两个细胞正在融合 正在融合的 淋巴细胞与骨髓瘤细胞 正在融合的鸡血细胞 仙台病毒 紫外线 灭活 丧失感染活性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合） ①什么是病毒的灭活？ 灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。 ②灭活病毒诱导细胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 5、优点：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 6.应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 植物体细胞杂交和动物细胞融合比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 诱导方法 用途 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得杂种植株 主要用于制备 单克隆抗体 凡能够引起机体产生特异性免疫应答的物质叫做抗原。 ⑴什么是抗原？ 例如花粉、病菌、病毒等。有时自身的组织或细胞也会成为抗原，如癌细胞等。 二、单克隆抗体 抗原决定簇： 抗原表面具有的某些特定的化学基团，能决定抗原特异性，是免疫细胞识别抗原的重要依据。 各种抗原的决定簇数目不同，同一抗原的决定簇可能有多种。 抗体是由何种细胞产生的？ 2. 抗体是如何产生的？ ？ 单克隆抗体 抗体分布于血清中，也分布于组织液及外分泌液中。 　　１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 　　２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 　　３．每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。 所以传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？ 怎样解决这个问题？ 由血清中提取的抗体是由不同淋巴细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为多克隆抗体。 特点： 产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。 抗原不纯 抗体不纯 抗原 动物体内 刺激 效应B 抗体 每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。 如果利用单个B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗体。 问题： 怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？ 在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞能无限增殖形成细胞群吗？ 什么样的细胞能够在体外无限增殖呢？ ——肿瘤细胞！ 科勒 米尔斯坦 荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖 如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。 骨髓瘤细胞 免疫小鼠 单克隆抗体 筛选 克隆、筛选 体内培养 体外培养 B淋巴细胞 （选择培养基） （抗体检测） 细胞融合 融合的细胞 杂交瘤细胞 杂交瘤细胞 B