动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

动物细胞融合与单克隆抗体 定义：使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。又称细胞杂交 杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞 一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 P52 动物细胞融合 2、诱导融合的方法 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞融合、形成杂种细胞 生物法：灭活的病毒诱导融合 化学法：聚乙二醇PEG 物理法：离心，振动，电激法 为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开， 细胞发生融合。 不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 3、动物细胞融合技术的应用 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 人们获得抗体的传统方法是? 反复将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取相应的抗体 这种方法的缺点是什么? 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体特异性差。 二：单克隆抗体的制备 哺乳动物感染病原体后，体内会产生相应的B淋巴细胞，分泌抗体，凝聚或杀死这些病原体。 动物在免疫过程中，体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上，但每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 怎样获得单一类型的抗体？ 用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体 B淋巴细胞在体外不能无限增殖。 用单个B淋巴细胞进行克隆，得到的细胞群能够分 泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗 体就叫做单克隆抗体。 单克隆抗体的制备 能产生特定抗体的B淋巴细胞和能无限增殖的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。 既能无限增殖，又能持续分泌成分单一 的特异性抗体。这种抗体分子，就是单克 隆抗体。 专一抗体检验阳性 用单个B淋巴细胞进行克隆，得到的细胞群能够分 泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗 体就叫做单克隆抗体。 免疫的小鼠 提取 B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 灭活的病毒等 特定的选择培养基 第一次筛选 杂交瘤细胞 第二次筛选 产生一种特定抗体，无 限增殖的杂交瘤细胞 杂交细胞 注射到小鼠腹腔 体外培养 提取单克隆抗体 1、动物特异性免疫 2、分离B淋巴细胞(B);找到骨髓瘤细胞(G)。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 3、细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 4、第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。 5、第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 6、选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 7、提取单克隆抗体。 问题强化： 1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 3、为何要进行两次筛选？ 4、如何进行第2次筛选？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。 第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生某一种抗体的杂交瘤细胞群。 2、单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，可大量制备。 1、作为体外诊断试剂：纯度高，特异性强，可以准确识别各种抗原的细微差别，并跟一定抗原发生特异性识别。 3、单克隆抗体的应用 在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点。