菌落总数测定—样品的稀释与培养.pdf

食品微生物

综合技能

食品中菌落总数测定-样品的稀释与培养

注重细节，成就事业

《道德经》中有言：天下

难事，必作于易；天下大

思事，必作于细。是以圣人

政终不为大，故能成其大。

园《细节的力量：新中国的

地

伟大实践》深刻揭示了中

国共产党带领人民从“站

的起来”“富起来”到“

强起来”的成功密码。

一、实验目的

1.掌握食品检样的处理、稀释与接种方法。

2.会倾注培养基并进行正确培养。

二、实验器材

天平、恒温培养箱、恒温水浴锅、高压蒸汽灭菌锅、平板计数琼脂

培养基、无菌生理盐水、灭菌刻度吸管、无菌平皿、酒精灯等。

三、检验标准

菌落总数测定标准检验方法：GB4789.2-2022

四、实验原理

食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养

温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成

的微生物菌落总数。

此方法要求每一个适应该条件的细菌必须而且只能形

成一个肉眼可见的菌落，计算菌落数可推出菌体数，最

终以菌落形成单位数(CFU)报告。

五、检验程序

六、实验步骤

1.检样的稀释

固体和半

固体样品

称取25g样品置盛于有225mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内，

8000r/min~10000r/min均质1min~2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，

用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1：10的样品匀液

六、实验步骤

1.检样的稀释

液体样品

以无菌吸管吸取25mL样品置于盛有225mL无菌磷

酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内

预置适当数量的无菌玻璃珠）中，或放入盛有

225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器

拍打1min～2min，制成1∶10的样品匀液。

六、实验步骤

1.检样的稀释

用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁

缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中，振摇试管或换用1支

无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1∶100的样品匀液。

按上述操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，

换用1次1mL无菌吸管或吸头。

六、实验步骤

1.检样的稀释

根据对样品污染状况的估计，选择

1个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体

样品可包括原液)，在进行10倍递增稀

释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，

每个稀释度做两个平皿。

同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

六、实验步骤

2.培养

及时将15mL~20mL冷却至

46℃～50℃的平板计数琼脂培养基

（可放置于48℃±2℃恒温水浴箱

中保温)倾注平皿，并转动平皿使

其混合均匀。

六、实验步骤

3.培养

待琼脂凝固后，将平板翻转，

36℃±1培养48h±2h。水产品30℃±1℃

培养72h±3h。

如果样品中可能含有在琼脂培养基表