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紫外可见分光光度法.pptx

发布:2024-07-19约1.56千字共73页下载文档
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紫外可见分光光度法;第一节紫外可见吸取光谱;一、电磁辐射的基本性质

1.电磁辐射的定义:;(2)具有波粒二象性。对光波来说,产生感光作用与生理作用的是电场强度E。;γ射线X射线远紫外区近紫外区可见光区

10-1nm10-1--10nm10--200nm200--400nm400--760nm

近红外区中红外区远红外区微波无线电波

0.76--2.5μm2.5--50μm50--300μm0.3mm--1m1--1000m;2.选择性吸取:分子或离子中的价电子的能级跃迁,规定光吸取的能量应与跃迁的能级差(ΔE)相适应,即光子的频率ν有;白光是复合光,两种对应颜色的光按合适的比例混合可成为白光,这两种光互称为互补光。;四、分子吸取光谱的产生;在一定的条件下(如温度、溶剂等确定),

能量变化为:;2.电子能级跃迁在200—760nm。;五、吸取曲线;;六、紫外-可见吸取光谱的产生;(二)有机化合物常见跃迁类型;(三)不一样跃迁所需能量不一样,所对应吸光

强度亦不相似;七、有机化合物的紫外可见吸取光谱;CH3—H;3.生色团(发色团);(2)επ→π*?εn→π*;(二)有机化合物的吸取带;(三)溶剂效应;2.溶剂化;(3)溶剂极性增大,由n→π*跃迁谱带移向短波,

即蓝移。原因:非键电子与极性溶剂(如水、

乙醇等)形成氢键,能量减少大。;(四)紫外可见吸取光谱的应用;第二节光吸取定律;一、朗伯—比尔(Lambert-beer)定律;规定:透光度(或透光率)T为;(二)朗伯-比尔定律;二、吸光系数与敏捷度;2.吸光系数a(L·g-1·cm-1);例题:浓度为0.5μg.ml-1的Cd2+溶液,经显色剂

显色后,在518nm处用1cm吸收池进行测定,测得

透光率为T=44.5%,求、a和ε(MCd=112.4).;三、吸光度的加和性和光强的加和性;2.光强的加和性;四、比尔定律的基本限制;五、光度测定误差;;2.杂散光的影响;∵实际工作中I0》Is∴Is/I0《1,

即S《1∴1+S≈1;3.仪器的读数误差;根据Beer’s定律:;设ΔT=0.01,以T为横坐标,Δc/c为纵坐标作图:;(二)化学误差;第三节紫外可见分光光度计;??本构成:;二、单色器;2.色散元件;;三、吸取池(比色皿);;2.原理:;(二)光电管;(三)光电倍增管;五、信号显示系统;手动可见分光光度计:72、721、722;2.单波长单光束分光光度计;;光源;第四节分析条件的选择;一、选合适的入射光波长;(二)试验确定措施;二、选择合适吸光度范围;第五节定量分析;一、单组分定量分析;二、多组分定量措施;2.Ai=εibci首要条件—保持线性;;(二)双波长分光光度法;等吸取双波长法;第六节应用实例;一、酸性磷酸酯酶的分析;黄色产物在波长405nm处有强吸取,其ε为1.88×104。;二、新生儿血清胆红素的测定;本章重点内容

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