紫外可见分光光度法 (2).ppt

紫外可见分光光度法中心实验室二零零七．四．一．概述二、朗伯-比尔定律三、紫外-可见分光光度计基本结构四、显色与测量条件的选择五、测定方法六．紫外分光光度法七、奶粉中磷的检测

一．概述

基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸光光度法。包括紫外可见分光光度法及红外光谱法等。紫外可见分光光度法所用的光谱区域为200～780nm，其中可见分光光度法400～780nm，紫外分光光度法为200～400nm。特点：㈠灵敏度高常用于测定试样1％～0.001％的微量成分，甚至可测定低于至10-6～10-7的痕量成分。㈡准确度较高测定的相对误差为2%～5%，采用精密的分光光度计测量，相对误差可减少至1%～2%。㈢适用范围广几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用吸光光度法测定。㈣操作简便、快速，仪器不贵，所以应用广泛。二、朗伯-比尔定律当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质溶液浓度、液层厚度乘积成正比，即A=kbc式中k是比例常数，与入射光波长和吸光物质的性质有关。c为溶液浓度，b为液层厚度。朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。三、摩尔吸光系数:如果浓度c用mol/l为单位、液面厚度以cm为单位，光的比例常数称为摩尔系数以ε表示，单位为L/(mol.cm)此时光的吸收定律可为：A=εbcε的单位为L/mol.cm，它表示物质的浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。摩尔吸光系数是通过测量吸光度值，再经过计算而求得的。三、紫外-可见分光光度计基本结构2.单色器将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；⑤出射狭缝。3.样品室样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。4.检测器利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。5.结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理四、显色与测量条件的选择（一）显色反应的选择1.选择显色反应时，应考虑的因素㈠选择性好一种显色剂最好只与一种被测组分起显色反应或显色剂与干扰离子生成的有色化合物的吸收峰与被测组分的吸收峰相距较少。㈡灵敏度高有色化合物的摩尔系数大。㈢有色络合物的离解常数要小:有色络合物的离解常数越