（高清版）DB13∕T 5348-2021 大丽花脱毒种苗生产技术规程.docx
ICS65.020.20CCSB05
DB13
河北省地方标准
DB13/T5348—2021
大丽花脱毒种苗生产技术规程
201-01-21发布2021-02-21实施
河北省市场监督管理局发布
DB13/T5348—2021
I
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构与起草规则》的规定起草。
本文件由河北省林业和草原局提出。
本文件由河北农业大学起草。
本文件主要起草人：陈段芬、向地英、牛善策、郝丽红、王丽霞、谷桂恕、邸葆、邓运川、梁娟。
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大丽花脱毒种苗生产技术规程
1范围
本文件规定了大丽花无菌苗培育、脱毒苗培养、脱毒苗快繁、原种苗培育、生产用苗繁育以及病虫害防治等内容。
本文件适用于大丽花脱毒苗生产繁育环节。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则
NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程
SN/T2964植物病毒检测规范
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
大丽花
大丽花（DahliapinnataCav.）是菊科大丽花属植物。
3.2
脱毒原种苗
脱毒组培瓶苗移栽于无病原、虫源的种苗圃内存活的植株。
4无菌苗培育
4.1外植体选择和处理
以大丽花顶芽或带腋芽茎段为外植体材料。将外植体用市售洗洁精稀释100倍后浸泡5min，用自来水冲洗2h，之后用75%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞处理4min～7min，并用无菌水冲洗5～8次，消毒滤纸吸干水分。
4.2培养基配制
培养基配制按NYT/T2306执行。
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4.3接种
接种操作按NY/T2306执行。
4.4初代培养
切取经消毒处理的茎尖接种到初代培养基中培养7天后，将无污染茎尖转接到新的初代培养基。
培养基配方：MS+6-BA4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L，在培养基中加入2g/L的活性炭。
4.5继代培养
初代培养产生的无菌小苗高5cm～10cm时，切取其带一对芽的茎段，接种到继代培养基上。
继代培养基配方：MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L。
5脱毒苗培养
5.1培养基配制
培养基配方为MS+6-BA4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L。待培养基温度降至50℃~60℃后，将25mg/L病毒唑（三氮唑核苷）用经高温灭菌后的注射器以0.22μm孔径的水相滤膜过滤后加入培养基中。
5.2茎尖处理
切取无菌苗嫩尖，在超净工作台上，解剖镜下剥取0.2mm～0.4mm的茎尖分生组织圆锥体，置于培养基上进行暗培养，待生长点开始萌动后，转移到光照条件下进行培养。
待苗高5cm～10cm时切取无菌苗嫩尖1cm，接种在添加有病毒唑的培养基上，40天后切取茎尖转移到不含病毒唑的MS+6-BA4mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L茎尖诱导培养基上进行培养。30天后转移到MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖40g/L+琼脂6g/L继代培养基上。
5.3病毒检测
待试管苗长到5cm～10cm时，切取叶片或幼嫩组织，按SN/T2964进行病毒检测，不得检出大丽花花叶病毒(DMV)、黄瓜花叶病毒（CMV）和烟草花叶病毒（TMV）。
6脱毒苗快繁
6.1初代培养和继代培养
经鉴定的脱毒苗按4.4和4.5给出的方法进行快繁。
6.2生根培养
待脱毒苗长到5cm～10cm时，截取2cm茎尖或茎段接种于生根培养基上。
生根培养基配方：1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
6.3培养条件
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光照强度30μmol·m-2·s-1～60μmol·m-2·s-1，白天温度25℃±2℃,夜间温度18℃±2℃。每天照光12h～14h。
7原种