DB32T 3115-2016 菊花脱毒种苗生产技术规程 .docx
ICS65.020.20B05
备案号：51460-2016DB32
江苏省地方标准
DB32/T3115-2016
菊花脱毒种苗生产技术规程
Technologyofvirus-freechrysanthemumstockproduce
2016-09-20发布2016-11-20实施
江苏省质量技术监督局发布
DB32/T3115-2016
I
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3待脱毒材料 1
4脱毒处理 1
5病毒检测 2
6脱毒原种苗的保存、扩繁与炼苗移栽 2
7脱毒原种苗的生物性状观察 3
8脱毒原种苗的繁殖 3
9建立脱毒苗母本圃 3
10脱毒种苗的质量检测 3
11包装与贮运 3
附录A（规范性附录）RNA病毒的反转录——聚合酶链式反应（RT-PCR）检测法 5
DB32/T3115-2016
II
前言
本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》组织编制。
本标准由南京农业大学提出并归口。本标准起草单位：南京农业大学。
本标准主要起草人：陈素梅、管志勇、吴丹、张飞、房伟民、蒋甲福、陈发棣。
DB32/T3115-2016
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菊花脱毒种苗生产技术规程
1范围
本标准规定了菊花脱毒种苗生产技术要求和规程.本标准适用于常见菊花脱毒种苗的生产。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
NY/T1591-2008菊花切花种苗等级规格
DB32/T1530-2009切花菊种苗生产技术规程
3待脱毒材料
凡有待进行脱毒处理的品种均应是通过合法途径引进的，签署有关品种权保护协议，或者经自主选育的、具有知识产权的品种。
4脱毒处理
4.1茎尖培养脱毒
4.1.1无菌苗再生体系的建立
经检测含有特定病毒的菊花，取其越冬脚芽，进行外植体表面灭菌，具体步骤如下：剪除茎段上的叶片，用流动的蒸馏水冲洗15分钟后，用滤纸吸干后，于超净工作台上用75%酒精浸泡30s，再转移到0.1%升汞中洗涤3～5min，取出，用无菌水冲洗5～6次，每次不少于3min，经消毒灭菌后的菊花茎段剪成小段，每段长2-3cm，带有1～2腋芽，接种于MS培养基中，每个组培瓶1～2个茎段。
4.1.2剥取茎尖
在超净工作台上操作，于解剖镜下，将材料置于消毒的滤纸上，用经消毒的手术刀和解剖针逐步剥去外层叶片，切取0.5～1.0mm直径大小的带有1～2片叶原基的茎尖顶端组织。
4.1.3分化培养
将剥取的茎尖接种于经过高温湿热灭菌的分化培养基上，并对接种的茎尖分别编号，置于25℃、光照强度1500～3000lx、光照时间16h/天的条件下培养，2～3个月后可分化出新芽。
DB32/T3115-2016
2
4.1.4诱导生根
切取1～2cm分化出的新芽接入生根培养基中，在25℃和光照强度1500～3000lx条件下，培养15~20d可长出新根。对每株生根苗进行编号。
4.2热处理结合茎尖培养脱毒
4.2.1热处理方法
将待脱毒的菊花植株放入光照培养箱中，采用变温升温的方式进行热处理，在日温/夜温分别为26℃/20℃下培养2d，而后每两天昼/夜温度分别升高2℃,直至38℃/30℃,该温度下培养40d。光照时间16h/天，光强为2000lx。剥取热处理过程长出的新梢顶端0.3～0.5mm的茎尖进行组织培养。
4.2.2热处理茎尖培养脱毒
按照4.1茎尖培养脱毒方法进行培养，分化出苗、转接生根，对每株生根苗进行编号。
5病毒检测
5.1主要病毒种类
菊花B病毒
ChrysanthemumvirusB
（CVB)
番茄不孕病毒
Tomatoaspermyvirus
（TAV)
番茄斑萎病毒
Tomatospottedwiltvirus
（TSWV)
黄瓜花叶病毒
Cucumbermosaiccucumovirus
（CMV)
菊花矮化类病毒
Chrysanthemumstuntviroid
（CS