NY_T 3032-2016草莓脱毒种苗生产技术规程.pdf

ICS 67.080.10B 31NY中华人民共和国农业行业标准NY/T3032—2016草莓脱毒种苗生产技术规程Technical code for the production of virus-free strawberry stock2016-12-23发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部5发布 NY/T3032—2016前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC510）归口。本标准起草单位：沈阳农业大学、北京市农林科学院林业果树研究所、湖北省农业科学院经济作物研究所。本标准主要起草人：张志宏、刘月学、张运涛、顾玉成、代红艳、常琳琳、李贺、王桂霞、向发云、马跃韩永超。I NY/T3032—2016草莓脱毒种苗生产技术规程1范围本标准规定了草莓茎尖培养脱毒方法、脱毒种苗保存与繁殖、检测病毒种类和RT-PCR检测方法。本标准适用于草莓脱毒种苗的培育及草莓活体材料中病毒的检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1茎尖培养脱毒viruseliminationby shoottip culture取0.2mm～0.5mm的茎尖，经组织培养获得无病毒植株的过程。2. 2脱毒原原种苗breedersvirus-freestock通过茎尖培养获得的不携带草莓镶脉病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓斑驳病毒且未经过组培增殖的无病毒原始植株。2. 3脱毒原种苗originalvirus-freestock脱毒原原种苗通过匍匐茎繁殖方式繁育出的无病毒植株。2. 4脱毒种苗virus-freestock脱毒原种苗通过匍匐茎繁殖方式繁育出的无病毒植株，3茎尖培养脱毒方法3.1茎尖剥离及接种田间选择表现品种特性的健壮植株并做标记。在匍匐茎发生初期，采集长约2cm的匍匐茎顶端，在超净工作台上去掉外层苞叶，用70%乙醇表面消毒30s，然后用2%的次氯酸钠溶液消毒10min，再用无菌蒸馏水冲洗3遍。逐层剥去匍匐茎顶端上的叶原基，用无菌刀片切取0.2mm～0.5mm大小的茎尖，接种在分化培养基上（培养基配方参见附录A。将接种后的培养瓶置于（23士2）℃、光照强度约24001x、每天光照时间14h～16h的培养室中进行培养。3.2茎尖分化成苗茎尖培养2个月后，分化成带有叶原基的小芽，将小芽转接到新鲜的分化培养基上继续培养当小芽长出叶片后，将带有叶片的小芽转移到成苗培养基上（培养基配方参见附录A）·大约培养2个月后分化成苗丛。对苗丛进行编号，然后从苗丛上剪取叶片进行病毒检测.淘汰感染病毒的苗丛，保留无病毒苗丛。3.3生根和移栽从脱毒苗丛上剪取株高在2cm以上的试管苗，将试管苗基部的小芽切除·然后接种在生根培养基中（培养基配方参见附录A）。在组培室中生根培养30d～40d后，将培养容器置于覆盖100目纱网的1 NY/T3032—2016温室中，炼苗1周。炼苗后.用镊子从培养容器中取出生根的试管苗清除试管苗根部附着的培养基，然后栽人盛有营养基质的50孔穴盘中.浇透水。营养基质配制方法：将草炭、蛭石、细土、腐熟的牛粪按照5：2：2：1（体积比）的比例混合.按1kg/m加人氮磷钾（20-5-10）复合肥.混匀·过筛.高温蒸汽消毒，备用。在穴盘上方搭建塑料小拱棚.塑料薄膜上加盖遮阳网。温度控制在10℃～28℃。移栽后第1周，空气相对湿度控制在90%以上；移栽后第2周一第6周，空气相对湿度控制在80%以上。通过打开小拱棚上的薄膜来降低小拱棚中的湿度。移栽6周后撤除小拱上的薄膜。移栽8周后试管苗生长发育成为可以定植的脱毒原原种苗。4脱毒原原种苗的保存脱毒原原种苗在网室中保存。网室用100目纱网构建，网室内工具专用，工作人员进人网室前洗手并更换工作服。将脱毒原原种苗定植在盛有营养基质（营养基质配方参见3.3)的栽植容器中。栽植容器长1m、宽60cm、高40cm。每个栽植容器定植1株脱毒原原种苗在开花结果期，观察脱毒原原种苗的植物学性状和生物学性状是否发生变化，淘汰有变异的植株。每年春季对脱毒原原种苗进行一次病毒检测，淘汰感染病毒的植株。5脱毒原种苗的繁殖在网室中脱毒原原种苗抽生的匍匐茎苗即为脱毒原种苗，秋季将脱毒原种苗栽植于直径10cm的营养钵中，翌年作为繁苗母株。6脱毒种苗的繁殖选择地势平坦、土质疏松、有机质丰富、排灌方便、光照充足、没有种植过草莓且距离草莓生产园10km以上的地块作为繁殖脱毒种苗的苗圃。苗圃地选好后，每667m²施腐熟有机肥3m²～5m、过磷酸钙30kg。结合施基肥，深翻土地。平整土地，耕匀耙细后做哇，哇宽1.2m。以脱毒原种苗作为母株，在春季平均气温达到10℃以上时将母株单行定植于哇中间，株距50cm～80cm。7病毒检测7.1检测病毒种类包括草莓