禽蛋中四环素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.docx

2

禽蛋中四环素类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了禽蛋中四环素类药物残留检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋、鸽子蛋中四环素、金霉素、土霉素、多西环素残留量的测定。其他禽蛋可参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经EDTA?2Na-McIlvaine缓冲液提取，正己烷除脂，玻璃纤维滤纸过滤，亲水亲脂平衡型固相萃取柱净化，氮气吹干后，用10%乙腈甲酸水溶液溶解，液相色谱-串联质谱法测定，基质匹配外标法定量。

5试剂与材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.3甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.4柠檬酸（C5H8O7·H2O）。

5.1.5磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。

5.1.6乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8·2H2O）。

5.1.7氢氧化钠（NaOH）。

5.1.8磷酸（H3PO4）。

3

5.1.9正己烷（C6H14）

5.2溶液配制

5.2.11mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水溶解成100mL，即得。

5.2.2EDTA?2Na-McIlvaine缓冲液：分别取柠檬酸12.9g，磷酸氢二钠10.9g，乙二胺四乙酸二钠39.2g，用水900mL溶解，用磷酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至4.0±0.05，加水稀释至1000mL。

5.2.3水饱和正己烷溶液：取水50mL，加正己烷200mL，摇匀，静置分层，取上层液。

5.2.40.1%甲酸溶液：取甲酸1.0mL，加水至1000mL，混匀。

5.2.510%乙腈甲酸水溶液：取乙腈10mL，加0.1%甲酸溶液稀释至100mL，混匀。

5.2.60.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸1mL，加乙腈稀释至1000mL，混匀。

5.3标准品

四环素、金霉素、土霉素、多西环素标准品，纯度均≥98%,具体见附录A。

5.4标准溶液制备

5.4.1标准储备液（100μg/mL）：取按其药物单体含量折算为100%质量的标准品各约10mg，精密称定，分别用甲醇适量使溶解并稀释定容至100mL，即得。-18℃以下保存，有效期1个月。

5.4.2标准中间液（1.0μg/mL）：准确移取标准储备液1.0mL，用10%乙腈甲酸水溶液稀释、定容至100mL，混匀。临用现配。

5.4.3标准系列溶液：准确移取标准中间溶液适量，用10%乙腈甲酸水溶液稀释、定容，混匀，配制成浓度分别为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的标准系列溶液，置2℃~8℃冰箱中避光保存。临用现配。

5.5材料

5.5.1亲水亲脂平衡型固相萃取柱：200mg/6mL，或性能相当者。

5.5.2玻璃纤维滤纸：1.5μm*110mm，或性能相当者。

5.5.3微孔滤膜：0.2μm，疏水系。

6仪器设备

6.1液相色谱－串联质谱仪：配有电喷雾电离源。

6.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。

6.3低温离心机：温度可达4℃,转速可达10000r/min。

6.4涡旋混合器。

6.5超声波清洗器。

6.6pH计：精度±0.01pH。

6.7氮吹仪。

6.8固相萃取装置。

7试样的制备与保存

7.1试样的制备

取适量新鲜的供试禽蛋，去壳，并使均质：

a）取均质后的供试样品，作为供试试样。

4

b）取均质后的空白样品，作为空白试样。

c）取均质后空白样品，添加适宜浓度的对照溶液，作为空白添加试样。

7