SN_T 4814-2017进出口食用动物四环素类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4814-2017进出口食用动物四环素类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法Determination of the tetracycline medicine residuse of liveanimals for import and export-LC-MS-MS method2017-07-21 发布2018-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局98339否涂层查真优 SN/T 4814—2017言前本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张勋、孟日增、赵韫慧、石建平、康明芹、王明泰、马书民、吴连鹏、刘韬、胡婷婷、杨帆、邢燕燕。w SN/T 4814—2017进出口食用动物四环素类药物残留量的测定‧液相色谱-质谱/质谱法1 范围本标准规定了进出口食用动物中四环素类药物残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本标准适用于测定食用动物猪、牛、羊的尿液和血液，鸡的血液中的四环素、金霉素、土霉素和强力霉素 4 种四环素类抗生素残留量。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样用0.1mol/LNazEDTA-Mcllvaine缓冲液（pH=4.0±0.05）提取，经过滤和离心后，上清液用HLB固相萃取柱净化，用1 mL甲醇定容，供液相色谱-质谱/质谱仪测定和确证，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙酸乙酯：色谱纯。4.3乙二胺四乙酸二钠(NazEDTA·2H²O)。4.4甲酸：色谱纯。4.57柠檬酸(C,HgO，·H2O)。4.6磷酸氢二钠(Na²HPO4·12H2O)。4.7柠檬酸溶液：0.1mol/L。称取21.01g柠檬酸（4.5），用水溶解，定容至1000mL。磷酸氢二钠溶液：0.2 mol/L。称取28.41 g磷酸氢二钠（4.6），用水溶解，定容至1000 mL。4.84.9Mcllvaine缓冲溶液:将1000 mL 0.1 mol/L柠檬酸溶液（4.7)与625 mL0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液（4.8)混合，用10mol/L氢氧化钠调节pH=4.0士0.05。4.10NazEDTA-Mcllvaine缓冲溶液:0.1 mol/L。称取 60.5g 乙二胺四乙酸二钠(（4.3)放人1 625 mLMcllvaine缓冲溶液（4.9）中，超声使其溶解，摇匀。4.11甲醇十水(1十19）:量取 5 mL甲醇(4.1)与 95 mL水混合。4.12甲醇+乙酸乙酯(1+9）:量取10 mL甲醇(4.1)与90 mL乙酸乙酯（4.2)混合。4.13Oasis HLB固相萃取柱:60 mg,3 mI,或相当者。使用前分别用 5 mL 甲醇,5 mL 水和 5 mLNa2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液预处理，并保持柱体湿润。4.14标准物质：四环素，金霉素，土霉素,强力霉素,纯度≥95%。 SN/T 4814—20174.15标准储备溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的四环素，金霉素，土霉素，强力霉素各20.0 mg，分别用甲醇溶解并定容至100mL，浓度相当于200mg/L，储备液在一18℃以下储存于棕色瓶中，可12个月。4.16混合标准工作液：根据需要，用甲醇（4.1)将标准储备溶液配制成1.0ug/mL的混合标准工作溶液。混合标准工作溶液应使用前配置。4.17滤膜：0.22 μm,有机相与水相两用。5仪器5.1液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.1 mg,0.01 g。5.3旋涡混合器。5.4低温离心机:10 000r/min,控温范围为一10℃至室温。5.5氮吹浓缩仪。5.6固相萃取真空装置。5.71pH计：测量精度士0.02。5.8超声提取仪。6样品制备与保存6.11食用动物（猪、牛和羊)尿液：新鲜澄清尿液可直接取用，若有杂质需离心去除沉淀物，取上清。长期保存需置于4℃下。6.2食用动物(猪、牛、羊和鸡)血液：全血凝固后取上层血清，避免溶血，若有溶血，可离心后取上清。长期保存需置于4℃下。6.3在制样和保存的操作过程中，应防止样品受到污染。７测定步骤7.1提取食用动物尿液和血液：称取试样5g（精确到0.01g），置于50mL容