SN_T 4747.1-2017进出口食用动物大环内酯类药物残留量的测定 放射受体分析法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4747.1-2017进出口食用动物大环内酯类药物残留量的测定放射受体分析法Determination of macrolide residues in live animal for import andexport---Radio-receptor assay method2017-05-12 发布2017-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局涂层查真 SN/T 4747.1—2017言前本部分为SN/T4747系列标准的第1部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，本部分由国家认证认可监督委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张立怀、陈本龙、柴铭骏、杨超、王万骞、刘洋、黄晨。1 SN/T 4747.1—2017进出口食用动物大环内酯类药物残留量的测定‧放射受体分析法1范围SN/T4747的本部分规定了进出口食用动物的血液和尿液中大环内酯类药物残留的检测方法。本部分适用于进出口食用活动物中大环内酯类药物中红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、林可霉素和替米考星的药物残留初筛检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6882分析实验室用水规格和试验方法3方法概述放射受体分析法是基于药物功能团与微生物受体位点结合，这些位点与某一类抗生素的共有功能基团相关，应用受体的这种特异性可以实现对某一类抗生素的多残留分析。本方法中，样品残留的大环内酯类药物经提取、稀释后与[14C］标记的红霉素共同竞争结合特异的受体位点，在一一定温度下反应后，离心分离清除未结合的大环内酯类药物，最后加人闪烁液测定[14CI衰变发出的β粒子放射性计cpm（count per minute）。测得的cpm值与样品中大环内酯类抗生素残留量成反比关系。4试剂和材料4.1大环内酯类抗生素（Charm-ⅡI测定试剂盒 1)（MRL Sequential Assay)1）。4.2阴性对照样品：大环内酯抗生素阴性对照浓缩干粉（MNC），使用时用10 mL水溶解，充分摇勾，使用之前回温至室温。长期贮存需在2℃～6℃。4.3MSU多抗生素浓缩标准品（MSUMA，为商品化大环内酯类药物残留 Charm-IⅡI测定试剂盒中自带）：含有多种大环内酯类抗生素的标准品。使用时用10mL水溶解，充分摇匀，使用之前在冰箱或冰浴中放置15 min。复溶后的标准品含10 000μg/kg红霉素。4.4MSU提取缓冲液浓缩干粉：用1 000 mL水溶解，充分摇勾，使用之前回温至室温。可于 2℃～6℃贮存2个月。4.5M2缓冲液：使用时取浓缩干粉用50mL水溶解，配制成M2缓冲液，调血清样品pH值用，可于2℃～6℃贮存2个月。4.60.1 mol/LNaOH，自己配制，调尿液样品 pH值用。4.70.1 mol/L.HCl，自已配制，调尿液样品 pH值用。4.8闪烁液。1）给出该信息是为了方便本部分的使用者，并不表示对某一产品操作步骤的认可。如果其他产品的操作步骤有不同，须经实验评估后采用。1 SN/T 4747.1--20174.9²带盖离心管:15 mL,50 mL。4.10pH 试纸。4.11水：符合 GB/T 6682 二级水的规定。5仪器和设备5.1液体闪烁计数仪：CharmⅡ7600分析仪。5.2分析天平：感量为0.1g和0.1mg。5.3离心机：离心力大于或等于1750g。5.4涡旋振荡器。5.5微量移液器:10 μL～100 μL,100 μl～1 000 μL、1 000 μL～5 000 μL。5.6恒温加热器：55℃士1℃。6分析步骤6.1试样制备与保存6.1.1试样制备尿液：新鲜澄清尿液可直接取用，若有杂质需离心去除沉淀物，取上清。2血液：全血凝固后取上层血清，,避免溶血,若有溶血，可离心后取上清。6.1.2试样保存试样可于-18℃以下保存。6.2检测方法6.2.1阴阳性对照液的配制阴性对照液的配制：取2mI.MNC溶液，加人6mL MSU提取缓冲溶液中混匀，制成阴性对照液，该对照液可在室温下保存8h。阳性对照液的配制：取0.3mI MSUMA多抗标准溶液，加人6mL阴性MNC溶液中混匀，然后从中取2 mL混合溶液加人到6 mL.MSU提取缓冲溶液中混勾，制成阳性对照液。阳性对照采用125μg/kg的红霉素（对应于4倍稀释的样品，代表样品中500μg/kg红霉素检测量）。该对照液可在室温下保存8h。6.2.2样品制备1取50 mI.清洁离心管，并标明标记。尿液样品或血清样品移取2.0ml.添加到50mL离心管内