微生物学实验.ppt

微生物大小的测定操作步骤装目镜测微尺校正目镜测微尺菌体大小的测定实验报告填写目镜测微尺校正表填写各菌大小测定结果第62页，共88页，星期日，2025年，2月5日紫外线灭菌器材：牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外线灯操作步骤紫外线灯直接照射30min、检查培养基37℃温箱培养24小时，无菌生长则可用化学消毒剂与紫外线照射结合使用试验报告检查灭菌是否彻底第30页，共88页，星期日，2025年，2月5日微孔滤膜过滤除菌一、目的要求：１.了解过滤除菌的基本原理。２.掌握过滤除菌方法。二、基本原理通过机械作用滤去液体或空气中的细菌第31页，共88页，星期日，2025年，2月5日微孔滤膜过滤除菌器材培养基、2%葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板注射器、微孔滤膜过滤器、0.22um滤膜、无菌试管、镊子、玻璃刮棒操作步骤组装滤膜、灭菌连接压滤无菌检查清洗试验报告记录无菌检查结果第32页，共88页，星期日，2025年，2月5日实验二微生物的染色与形态结构的观察主要内容细菌的简单染色法革兰氏染色法细菌的芽孢染色法荚膜染色法第33页，共88页，星期日，2025年，2月5日细菌的简单染色法一、目的要求：１.学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。２.初步认识细菌的形态特征。3.巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。二、基本原理常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料电离时其分子的染色部分带正电荷，染料易使细菌着色。第34页，共88页，星期日，2025年，2月5日细菌的简单染色法器材菌种：枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液操作步骤涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操作挑少许菌苔涂成薄膜干燥：室温自然干燥固定：热固定载玻片涂面朝上通过火焰2-3次染色：载玻片平放，滴加染液覆盖薄膜，染约1min水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液干燥镜检试验报告根据观察结果绘出细菌形态图第35页，共88页，星期日，2025年，2月5日革兰氏染色法一、目的要求：１.学习并初步掌握革兰氏染色法。２.了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。二、基本原理1884年丹麦病理学家ChristainGram创立。基本组成为结晶紫、碘液、酒精、复红。细胞保持蓝紫色为革兰氏阳性菌，成红色为革兰氏阴性菌。染色性与细菌细胞壁的组成和结构有关。第36页，共88页，星期日，2025年，2月5日革兰氏染色法器材菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物、蜡样芽孢杆菌12-20h营养琼脂斜面培养物。染色剂：革兰氏染液操作步骤制片：常规涂片、干燥、固定初染：滴加结晶紫染色1-2min，水洗媒染：用碘液冲去残水，加碘液覆盖染1min，水洗脱色：滤纸吸去残水，95%乙醇脱色，水洗复染：用复红液染2min干燥镜检试验报告根据观察结果说明细菌的形状、颜色、及革兰氏染色反应第37页，共88页，星期日，2025年，2月5日细菌的芽孢染色法一、目的要求：１.学习并掌握芽孢染色法。２.初步了解芽孢杆菌的形态。二、基本原理芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，其特征是鉴定细菌的依据之一。用着色能力强的染液（如：孔雀绿、石炭酸复红）在加热情况下透过菌体进入芽孢使其着色，通过水洗菌体的颜色被洗掉，芽孢的染色则被保留，从而区分菌体与芽孢。第38页，共88页，星期日，2025年，2月5日细菌的芽孢染色法器材菌种：蜡样芽孢杆菌2d营养琼脂斜面培养物、球形芽孢杆菌1-2d营养琼脂斜面培养物。染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液操作步骤（Schaeffer-Fulton氏染色法）制片：常规涂片、干燥、固定染色：滴加数滴孔雀绿染液，火焰上加热至染料冒蒸汽时开始记时染5min，水洗复染：用番红液复染2min，水洗干燥镜检试验报告根据观察结果绘出芽孢杆菌的形态特征第39页，共88页，星期日，2025年，2月5日荚膜染色法一、目的要求：学习并掌握荚膜染色法。二、基本原理荚膜是包围在细菌细胞外的一层黏液状或胶质状物质，主要成分为多糖、糖蛋白或多肽。荚膜与染液亲和力低、不易着色，且可溶于水，通过水洗可在菌体的周围形成一透明圈。第40页，共88页，星期日，2025年，2月5日荚膜染色法器材菌种：褐球固氮菌约2d无氮琼脂斜面培养物。染色剂：绘图墨水、1%甲基紫水溶液、1%结晶紫水溶液、6%葡萄