草果不同极性萃取物总黄酮、总多酚含量与其抗氧化活性的相关性.docx

摘要

以草果为原料，通过50%乙醇、水、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇、甲醇和石油醚不同极性溶剂萃取活性物质，探讨萃取物中总黄酮和总多酚含量与总还原能力及对DPPH·、ABTS+·、OH-、NO2-清除能力的相关性。结果表明：50%乙醇萃取物总黄酮和总多酚含量均最高，各萃取物均有抗氧化能力，且呈明显的量效关系，其中50%乙醇萃取物总还原能力、清除ABTS+·和DPPH·能力最强，石油醚萃取物清除OH-和NO2-能力最强。相关性分析表明草果萃取物中总黄酮含量与ABTS+·清除能力呈极显著相关，与DPPH·清除能力呈显著相关，总多酚含量与对ABTS+·和DPPH·的清除能力呈极显著相关，可为草果作为天然抗氧化剂提供理论依据。

引言

草果（AmomumtsaokoCrevostetLemaire）为姜科豆蔻属多年生草本植物，又名草果仁、草果子，广泛分布于云南、贵州、四川等地。干燥成熟的草果属于药食同源植物，其主要成分为挥发油、萜类、黄酮类、酚类等]。作为香辛料，其特有的香辛味，可以去除牛、羊、鱼肉膻腥味，增进食欲而广泛应用于食品行业,被誉为食品调味料中“五香之一”。作为传统中药，具有消食化瘀、祛痰除疟、祛湿除寒、理气健脾的作用。近年来，草果药用价值日益成为研究热点。

目前，对草果的研究报道主要集中在草果挥发油、多酚、黄酮的提取工艺，而关于草果不同极性溶剂萃取，萃取物中总黄酮、总多酚与其抗氧化性的相关性分析未见报道。本文利用7种不同极性溶剂萃取草果生物活性物质，测定总黄酮和总多酚含量，采用DPPH自由基清除能力、ABTS+自由基清除能力、羟基自由基清除能力、NO2-清除能力和总还原力对其抗氧化能力进行评价，探讨草果总黄酮、总多酚与其抗氧化性的相关性，以期为草果的开发利用奠定理论基础。

正文部分

1?实验部分

1.1??主要仪器与试剂

1.2??实验方法

1.2.1?草果不同极性溶剂提取物制备

1.2.2?芦丁标准曲线的绘制与草果总黄酮的测定

1.2.3?没食子酸标准曲线的绘制与草果总多酚的测定

1.2.4?草果提取物抗氧化活性检测

1.2.4.1??DPPH自由基清除能力

1.2.4.2?ABTS自由基清除能力

1.2.4.3?羟基自由基清除能力测定

1.2.4.4?NO2-清除能力测定

1.2.4.5?总还原力测定

1.3??数据统计分析

实验数据采用SigmaPlot10.0软件、SPSS20.0软件进行数据处理、绘图及相关性分析。

2?结果与讨论

2.1?不同极性萃取物中草果总黄酮含量

草果不同极性萃取物中草果总黄酮含量如图1所示，50%乙醇萃取物总黄酮含量最高，为1.842mg/g，显著高于其他溶剂萃取物。其次为甲醇萃取物，为1.036mg/g。石油醚萃取物总黄酮含量最低。不同极性萃取物总黄酮含量由大到小依次为：50%乙醇甲醇水丙酮乙酸乙酯正丁醇石油醚。

2.2?不同极性萃取物中草果总多酚含量

草果不同极性萃取物中草果总多酚含量如图2所示，50%乙醇总多酚含量最高，为0.570mg/g，显著高于其他溶剂萃取物。其次为甲醇萃取物，为0.474mg/g。石油醚萃取物总多酚含量最低。不同极性萃取物总多酚含量由大到小依次为：50%乙醇甲醇水丙酮乙酸乙酯正丁醇石油醚。

2.3?不同极性萃取物抗氧化活性

2.3.1?清除DPPH自由基能力

DPPH自由基是一种非生理性自由基，它是以氮为中心，较为稳定。当溶液中的抗氧化剂提供氢原子时，DPPH自由基中的孤对电子被配对而使得溶液颜色变浅，即逐步被抗氧化剂还原。由图3可知，在浓度0～0.20mg/mL范围内，DPPH自由基清除能力随浓度的增大而增强。当浓度为0.05mg/mL，50%乙醇和甲醇萃取物清除DPPH自由基能力显著提高，之后趋于稳定。由表1可知，50%乙醇萃取物清除DPPH自由基能力最强，其IC50值为0.0362?mg/mL，不同萃取物清除能力由大到小依次为:50%乙醇甲醇乙酸乙酯石油醚水正丁醇丙酮。

2.3.2?清除ABTS+自由基能力

ABTS+二铵盐与过硫酸铵反应，会生成蓝绿色的ABTS+自由基溶液，但是当反应物中加入自由基清除剂时会清除该自由基并使溶剂颜色变浅，在波长734nm下，吸光度减弱。由图4可知，草果不同极性萃取物均有清除ABTS+自由基能力，随着浓度的增加，清除能力不断增强。

2.3.3?清除羟基自由基能力

双氧水和铁离子发生芬顿反应产生羟基自由基，在该反应体系中加入水杨酸，水杨酸会与羟基自由基发生反应并生成有色物质，当试液中存在抗氧化物质时，羟基自由基被清除以至有色物质生成减少，吸光度减弱。由图5可知，草果不同极性萃取物均有清除羟基自由基能力，随着浓度的增加，清除能力不断增强。

2.3.4?清除NO2-能力

亚硝酸盐