猪轮状病毒 VP4 蛋白抗体（RV VP4 Ab）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书.PDF

南京森贝伽生物科技有限公司

猪轮状病毒VP4蛋白抗体（RVVP4Ab）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：

本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中轮状病毒VP4蛋白抗体（RVVP4Ab）

的含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中猪轮状病毒VP4蛋白抗体（RVVP4Ab）水平。用纯化

的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被微孔中依次加入已知浓度的标准品和未知浓度的

待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫

复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸

的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的轮状病毒VP4蛋白抗体（RVVP4Ab）

呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪轮

状病毒VP4蛋白抗体（RVVP4Ab）浓度。

试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶标准品S1（200ng/L）0.5ml×1瓶

2链霉亲和素-HRP6ml×1瓶标准品S2（100ng/L）0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条8标准品S3（50ng/L）0.5ml×1瓶

4生物素标记的抗-IgG抗体6ml×1瓶标准品S4（25ng/L）0.5ml×1瓶

5显色剂A液6ml×1瓶标准品S5（12.5ng/L）0.5ml×1瓶

6显色剂B液6ml×1/瓶9说明书1份

7终止液6ml×1瓶10封板膜2张

标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

1.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复

孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样

品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中加入50微升样本，盖上封

板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

3.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复4次，拍干。

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5.加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分

钟

6.洗涤：操作同4。

7.加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30

分钟。

8.洗涤：操作同4。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止

液后15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以