超声波辅助双水相体系优化橘红花总黄酮提取工艺及其抗氧化活性.docx

背景介绍

黄酮是橘红花的主要活性成分之一，具有较强的抗氧化和消除自由基的活性。天然产物中的黄酮类物质的提取方法有超声波辅助提取法、有机溶剂提取法、微波辅助提取法、双水相提取法等，其中超声波辅助提取法具有提取效率高、时间短、操作简单等优点，而双水相提取法则是利用活性成分在互不相溶的双水相间分配系数的差异实现提取分离的，条件温和，提取效率高，且不存在有机溶剂残留的问题。本文采用超声波辅助双水相法提取橘红花中总黄酮，在单因素试验的基础上，通过Box-Behnken响应面分析法，确定橘红花中总黄酮的最佳工艺条件，并评价其体外抗氧化活性，以期为橘红花的进一步开发利用提供科学依据。

文章亮点

1.超声波辅助双水相体系提取橘红花总黄酮的最佳条件为：乙醇浓度55%、硫酸铵浓度为0.3g/mL，超声温度50℃，超声时间30min，液料比为20:1（mL/g），所得橘红花总黄酮得率为5.03%。

2.抗氧化实验结果表明，橘红花总黄酮对DPPH和ABTS+自由基的IC50分别为0.124和0.173mg/mL，与维生素C相比，抗氧化活性较弱。

内容简介

1?实验部分

1.1??主要仪器与试剂

1.2??实验方法

1.2.1??橘红花的处理和总黄酮的提取

1.2.2??标准曲线的建立和橘红花总黄酮提取得率的测定

1.2.3??单因素试验

准确称取3.0g橘红花粉末，置于锥形瓶中，在超声功率为240W下，固定乙醇浓度55%、硫酸铵浓度0.3g/mL、超声时间30min、超声温度50℃、液料比20:1mL/g，分别考察乙醇浓度（35%、45%、55%、65%、75%）、硫酸铵浓度（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5g/mL）、超声时间（10、20、30、40、50min）、超声温度（30、40、50、60、70℃）、料液比（10:1、15:1、20:1、25:1、30:1mL/g）等各因素对橘红花总黄酮得率的影响。

1.2.4??Box-Behnken响应面优化设计通过单因素试验确定影响橘红花总黄酮得率的主要因素为乙醇浓度、硫酸铵浓度和超声温度以及各因素的较优水平范围，在此基础上用软件Design-ExpertV8.0.6进行Box-Behnken响应面实验设计及分析，因素水平见表1。

1.2.5??HPLC法测定橘红花总黄酮成分

1.2.6??橘红花总黄酮抗氧化活性测定

1.2.6.1??DPPH自由基清除能力的测定

1.2.6.2??ABTS+清除能力测定

2??结果与讨论

2.1??单因素实验结果

2.1.1??乙醇浓度对橘红花总黄酮得率的影响

2.1.2??硫酸铵浓度对橘红花总黄酮得率的影响

2.1.3??超声时间对橘红花总黄酮得率的影响

2.1.4??超声温度对橘红花总黄酮得率的影响

2.1.5??液料比对橘红花总黄酮得率的影响

2.2??Box-Behnken响应面实验结果

2.2.1??响应面分析

2.2.2??验证试验

2.3??橘红花总黄酮的HPLC测定结果

2.4??橘红花总黄酮的抗氧化活性

2.4.1??橘红花总黄酮对DPPH自由基的清除能力

2.4.2??总黄酮对ABTS+自由基清除能力

3??结论

本文在单因素实验结果的基础上，采用Box-Behnken响应面法分析，得到超声波辅助双水相体系提取橘红花总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇浓度为55%、硫酸铵浓度为0.3g/mL、超声温度为50℃，超声时间30min，液料比为20:1（mL/g），在此工艺条件下，总黄酮得率为5.03%，与预测值接近。橘红花总黄酮对DPPH自由基和ABTS+自由基的IC50值分别为0.124、0.173?mg/mL，具有较强的抗氧化活性。本文为橘红花在食品、保健品和药品领域作为天然抗氧化剂进行开发提供了依据。