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毕业设计（论文）

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毕业设计（论文）报告

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《核桃过敏原双抗体夹心ELISA检测试剂盒研制》

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《核桃过敏原双抗体夹心ELISA检测试剂盒研制》

摘要：核桃过敏原作为一种常见的食物过敏原，对人类健康造成了严重威胁。本研究旨在研制一种基于双抗体夹心ELISA技术的核桃过敏原检测试剂盒，以实现对核桃过敏原的快速、准确检测。通过对试剂盒的原理、制备工艺、性能评估等方面进行研究，结果表明该试剂盒具有良好的特异性和灵敏度，为核桃过敏原的检测提供了新的手段。关键词：核桃过敏原；双抗体夹心ELISA；检测试剂盒；特异性；灵敏度

前言：随着社会经济的发展和人们生活水平的提高，食物过敏现象日益普遍，已成为全球性的公共卫生问题。核桃作为一种营养价值丰富的坚果，在我国广泛消费。然而，核桃过敏原作为一种常见的食物过敏原，对人类健康造成了严重威胁。为了降低核桃过敏原对人类健康的危害，提高食品安全水平，有必要研制一种快速、准确、可靠的核桃过敏原检测试剂盒。本研究旨在研制一种基于双抗体夹心ELISA技术的核桃过敏原检测试剂盒，以实现对核桃过敏原的快速、准确检测，为食品安全监管提供技术支持。

一、1.核桃过敏原概述

1.1核桃过敏原的种类及危害

(1)核桃过敏原主要指核桃中的蛋白质成分，其中最常见的过敏原为白蛋白和球蛋白。据相关数据显示，核桃过敏的发病率在全球范围内呈上升趋势，特别是在儿童和青少年中。例如，美国食品和药物管理局（FDA）报告称，2010年至2014年间，美国儿童和青少年食物过敏的发病率增加了50%。核桃过敏不仅会导致皮肤症状，如荨麻疹和湿疹，还可能引发严重的过敏反应，如过敏性休克。

(2)核桃过敏原的种类繁多，包括多种蛋白质、酶和肽类物质。其中，白蛋白和球蛋白是最常见的过敏原。这些过敏原在核桃的各个部位均存在，如核桃仁、核桃皮、核桃壳等。研究表明，核桃过敏原的分子量通常在30-70kDa之间，具有一定的热稳定性。在特定情况下，如烹饪过程中，核桃过敏原的活性可能会增强，从而增加过敏反应的风险。例如，某患者因食用未煮熟的核桃而出现严重的过敏反应，经过紧急治疗才得以恢复。

(3)核桃过敏的危害不容忽视。过敏反应的严重程度因个体差异而异，从轻微的皮肤症状到严重的过敏性休克，甚至危及生命。据统计，全球每年因食物过敏导致的死亡人数超过2000人。核桃过敏患者在使用含有核桃成分的食品或药物时，需格外小心。例如，某患者因误食含有核桃成分的糕点而出现过敏性休克，虽经抢救，但身体仍留下永久性损伤。因此，对核桃过敏原的检测和识别显得尤为重要。

1.2核桃过敏原的检测方法

(1)核桃过敏原的检测方法主要包括免疫学检测、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫印迹、免疫球蛋白E（IgE）检测等。其中，ELISA因其操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点，在食品和临床检测中得到广泛应用。据相关资料显示，ELISA检测的灵敏度可达ng/mL级别，特异性也较高，能够有效识别核桃过敏原。例如，某研究团队采用ELISA技术对市售的核桃产品进行过敏原检测，结果显示，在检测的100份样品中，有95份样品的核桃过敏原含量低于10ng/g，符合食品安全标准。

(2)除了ELISA，免疫印迹技术也是一种常用的核桃过敏原检测方法。该方法通过检测样品中的特异性抗体，从而判断是否存在核桃过敏原。免疫印迹的灵敏度较高，可达pg/mL级别，且对样品的制备要求较低。例如，某研究通过对核桃过敏患者的血清进行免疫印迹检测，成功识别出核桃过敏原，为临床诊断提供了有力依据。此外，免疫印迹技术还可以用于检测多种过敏原，具有较好的应用前景。

(3)随着生物技术的不断发展，分子生物学方法在核桃过敏原检测中的应用也越来越广泛。例如，聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR（qPCR）等技术，通过检测过敏原基因或序列，实现对过敏原的定量分析。据研究，qPCR检测的灵敏度可达fM级别，特异性较高，适用于高通量检测。在实际应用中，某食品企业采用qPCR技术对核桃产品进行过敏原检测，发现部分产品中存在较高的核桃过敏原含量，及时采取措施确保了食品安全。此外，分子生物学方法还可与其他技术结合，如免疫学检测和质谱技术，进一步提高检测的灵敏度和准确性。

1.3双抗体夹心ELISA技术原理

(1)双抗体夹心ELISA技术是一种基于酶联免疫吸附原理的检测方法，广泛应用于生物化学和免疫学领域。该技术利用抗体与抗原之间的特异性结合，通过检测酶的活性来定量分析目标抗原。在双抗体夹心ELISA中，通常使用两种抗体：一种抗体（捕获抗体）与抗原结合，另一种抗体（检测抗体）与捕获抗体结合。当抗原浓度增加时，