狂犬病病毒elisa抗体检测试剂盒等.doc

附件23（略） 附件4 狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒等种兽药产品（）兽用 通用名 狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒 商品名 无 英文名 ELISA Kit For Rabies Virus Antibodies 汉语拼音 Kuangquanbingdu ELISA Kangti Jiance Shijihe 【主要成分与含量】 试剂 规格 数量 抗原包被板 96孔/块 1块 羊抗犬IgG酶标抗体 0.5ml/瓶 1瓶 质控阳性血清 0.5ml/瓶 1瓶 质控阴性血清 0.5ml/瓶 1瓶 参考血清 0.5ml/瓶 1瓶 样品稀释液 30ml/瓶 1瓶 酶标抗体稀释液 20ml/瓶 1瓶 20倍洗涤液 20ml/瓶 1瓶 底物A液 7ml/瓶 1瓶 底物B液 7ml/瓶 1瓶 终止液 7ml/瓶 1瓶 【性状】 试剂盒的外包装应洁净、无破损，标签应符合国家有关规定，内包装应无破损、无裂痕、无渗漏，品名、批号、保存条件、有效期和合格证清晰。 （1）抗原包被板（96孔板） 无色透明，干燥，无杂质吸附，装量为1块。 （2）羊抗犬IgG酶标抗体 无色或淡黄色澄明或半透明液体，装量为0.5ml，1瓶。 （3）质控阴性血清 疏松状淡黄色团块，1瓶。 （4）质控阳性血清 疏松状淡黄色团块，1瓶。 （5）参考血清 疏松状淡黄色团块，1瓶。 （6）样品稀释液 淡黄色透明液体，装量为30ml，1瓶。 （7）酶标抗体稀释液 淡黄色透明液体，装量为20ml，1瓶。 （8）20倍浓缩洗涤液 无色透明液体，装量为20ml，1瓶。 （9）底物A液 无色透明液体，装量为7ml，1瓶。 （10）底物B液 无色透明液体，装量为7ml，1瓶。 （11）终止液 无色透明液体，装量为7ml，1瓶。 【作用与用途】 用于酶联免疫吸附试验，检测犬血清中的狂犬病病毒IgG抗体。 【用法与判定】 1 需要自备的材料 去离子水或生理盐水、可调移液器、1000ml的量筒、酶标仪、37℃温箱。 2 预备步骤 2.1 做好质控血清、参考血清（或OIE狂犬病阳性参考血清）和待检样品的版面布置和记录。 2.2 质控阳性血清、质控阴性血清的稀释 用0.5ml样品稀释液复溶质控阳性血清和质控阴性血清，并作10倍系列稀释至1:100。 2.3 参考血清的稀释 用0.5ml样品稀释液复溶参考血清，按照下述稀释方法得到标准曲线，先将参考血清稀释至0.4EU/ml，再进行1:10稀释至0.04 EU/ml，在此基础上进行2倍稀释，即得到下述梯度参考血清：0.04EU/ml，0.02EU/ml，0.01EU/ml，0.005 EU/ml，0.0025EU/ml，0.00125EU/ml，0.000625EU/ml（如使用参考血清为OIE狂犬病阳性参考血清，按上述稀释方法稀释至0.04IU/ml，0.02IU/ml，0.01IU/ml，0.005 IU/ml，0.0025IU/ml，0.00125IU/ml，0.000625IU/ml）。 2.4 待检血清稀释 将待检血清10倍系列稀释至1:100。 3 检测步骤 3.1 对照血清和样品的加样 将稀释好的不同效价的参考血清、质控阴性血清、质控阳性血清和待检样品按照版面布置加入板孔内，100μl/孔，对照血清和样品分别作2孔重复。 3.2 孵育 37℃恒温培养箱内孵育30分钟。 3.3 洗板 用去离子水将浓缩洗涤液进行20倍稀释备用，弃掉板孔内液体，加洗涤液，200μl/孔，洗涤5次，甩干。 3.4 加酶标抗体 用酶标抗体稀释液按照1:100稀释酶标抗体，100μl/孔。 3.5 孵育 37℃恒温培养箱内孵育60分钟。 3.6 洗板 弃掉孔内液体，加洗涤液，200μl/孔，洗涤5次，甩干。 3.7 显色 底物A、B液等体积混合，每孔加100μl。 3.8 孵育 37℃恒温培养箱内避光孵育20分钟。 3.9 终止 向每个酶标板孔中加入终止液50μl。 3.10 检测 在酶标仪上设置波长为450nm条件下测出OD450nm值。 4 结果判定 4.1 当质控阳性血清OD450nm值≥0.6，质控阴性血清OD450nm值≤0.1，且当ln(参考血清OD450nm值)与ln（参考血清中狂犬病病毒抗体滴度）之间的相关系数（R）不小于0.95时，试验结果才有效。 4.2 检测结果的计算 4.2.1 计算各稀释度参考血清(从4EU/ml至0.0625EU/ml，不考虑其1:100稀释)的平均OD 450nm值，及平均OD