DB22_T2946-2018_野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范_吉林省.docx
ICS65.020
DB22
B05
吉林省地方标准
DB22/T2946—2018
野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范
Technicalspecificationsforbioassayofwildsoybeanresistancetosoybeancyst
nematode(Heteroderaglycines)
吉林省市场监督管理厅发布
DB22/T2946—2018
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准由吉林省农业农村厅提出并归口。
本标准起草单位：吉林省农业科学院。
本标准主要起草人：袁翠平、董英山、王玉民、赵洪锟、刘晓冬、齐广勋、王英男、李玉秋、颜秀
娟。
I
DB22/T2946—2018
野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范
1范围
本标准规定了野生大豆对大豆胞囊线虫抗性的鉴定方法和抗性评价。
本标准适用于野生大豆种质资源对大豆胞囊线虫的抗性鉴定与评价。
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1
2.2
2.3
胞囊cyst
大豆胞囊线虫雌虫，每个胞囊内约含200粒～600粒卵，从胞囊中孵化出来即为二龄幼虫。
胞囊指数（雌虫指数）femaleIndex（FI）
接种后28d~30d，供试植株根系上的胞囊数占感病对照植株根系上胞囊数的百分比。
在形态上没有差异，但在寄主上具有显著致病性差异的大豆胞囊线虫群体，需采用特定的一套鉴别
3.1.1.1宜使用本地区优势HGtype或混合大豆胞囊线虫群体。
3.1.1.2将含有大于30个/100g胞囊的病土装入高度16cm～25cm，盆口径15cm～25cm的塑
料盆中，播种高感大豆品种，每盆3株～5株。
3.1.1.3出苗后30d～35d，将大豆根系轻轻拔出，用高压水枪冲洗根系，将根系上的胞囊收集于
干净的塑料桶内。
3.1.2胞囊和二龄幼虫悬浮液的制备
3.1.2.1将含有胞囊的悬液倒入自上而下依次为20目,40目,60目的套筛上，将胞囊收集在60目
网筛上。
3.1.2.2将3.1.2.1收集到的胞囊用橡胶棒碾碎，使之释放出卵和少数的二龄幼虫。用洗瓶冲洗卵和
二龄幼虫，将其冲入自上而下依次为200目，500目的套筛上，将卵和二龄幼虫收集在500目网筛上。
用洗瓶将500目网筛上的卵和幼虫转移到烧杯中，加水配制成卵和幼虫悬浮液。
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3.1.2.4
摇匀并用100μL的移液器吸取一定量的卵和幼虫悬浮液置于载玻片上，通过40倍显微镜
观察计数卵和幼虫，配制成2000个/mL卵和幼虫的悬浮液，备接种用。
3.2接种植物的准备
3.2.1种子消毒
将健康饱满待鉴定的野生大豆、感病对照种子，用1%次氯酸钠溶液浸泡3min，期间搅动2次～
3次，然后用灭菌的蒸馏水冲洗3次～4次。
3.2.2
种子萌发
3.2.2.1消毒后的野生大豆种子在萌发前用无菌刀片在远胚芽处划破种皮。
3.2.2.2将灭菌的滤纸放置在灭菌的培养皿内，然后将种子放置在湿润的滤纸上，于光照培养箱中25
℃发芽3d，期间保持滤纸湿润。
3.2.3幼苗移栽
3.2.3.1抗胞囊线虫鉴定试验在温度保持在27℃±2℃温室内进行。
3.2.3.2试验完全随机或随机区组设计，设3次重复，每个重复5株。
3.2.3.3在直径27cm，高30cm的塑料桶中放入5cm厚的灭菌细砂，然后将直径4cm，长25cm
两端通透的PVC管插入细砂中，每个桶约插入20个PVC管，PVC管内和管间填好细砂，且高度一致，
细砂距离上管口2cm。
3.2.3.4将萌发3d健壮的幼苗移栽于PVC管中，每管移栽1株，将移栽后的塑料桶置于27℃～
28℃的自动恒温水浴箱中。
在距离供试植株1cm处用玻棒扎一个深4cm～5cm的孔，用移液器向孔中注射1mL的卵和幼虫
悬浮液，用灭菌的细砂将孔填平。
苗期及时浇水，保持细砂湿润，温室温度保持在27℃±2℃，每个处理定期施用等量营养液。
3.5.2.1.1将PVC管连同细砂和植株从桶中轻轻拔出，用高压水枪冲洗PVC管，将细砂和植株冲洗
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3.5.2.1.2将含有胞囊和细砂的悬浊液过20目,40目,60目的套筛，再向塑料桶注入自来水，摇
匀，将含有胞囊和细砂的悬浊液再过20目,40目,60