大豆胞囊线虫生理小种鉴定技术规程.docx
DB2301/TXX—XXXX
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大豆胞囊线虫生理小种鉴定技术规程
1范围
本文件规定了大豆胞囊线虫（HeteroderaglycinesIchinche）温室定量接种鉴定方法、鉴定记载和鉴定档案的建立。
本文件适用于哈尔滨市大豆种质资源和品种对大豆胞囊线虫生理小种的鉴定与评价。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T3059-2016大豆抗胞囊线虫鉴定技术规程
3术语和定义
NY/T3059-2016界定的术语和定适用于本文件。
4鉴定方法
4.1土壤和蛭石准备
采集没有种过大豆或豆科植物的土壤，最好是蔬菜地土壤，过20目筛，与同样过筛后的沙子以2：1的比例混合，1个气压（121℃)湿热灭菌2h后，装入直径5cm、高20cm的无底塑料钵柱备用（每个钵柱装土600g）。蛭石也经1个气压（121℃)湿热灭菌2h。
4.2鉴别寄主准备
将5个鉴别寄主（PI88788、PI90763、Peking、Pickett、Lee）的大豆种子置于灭菌的蛭石中，放入恒温培养箱，温度22℃~28℃,子叶即将展开时，选根长相同的幼苗移栽于已经装好土的塑料钵柱中,每个塑料钵柱栽植1株，塑料钵柱装入塑料桶中，每桶放置一套鉴别寄主。每个待鉴定大豆胞囊线虫样本用4桶。随机放置在日光温室内，温室22℃~28℃、16h光照条件下。每天正常浇水管理。
4.3接种物制备
将待测样本的胞囊置于200目和500目套筛上，用自制的组织研磨器将200目筛上的胞囊进行破壁研磨，或用橡皮塞在200目筛上研磨，释放出胞囊内的卵，然后用强水流冲洗200目筛上物，收集500目筛上的卵，配制成150粒/mL的卵和线虫悬液，4℃保存备用。
4.4线虫卵接种
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大豆苗移栽3d后接种大豆胞囊线虫卵悬浮液。采用根围接种法，每株苗接种10mL线虫卵悬浮液（150粒/mL），即接种1500粒卵/株大豆。试验4次重复,即共4个塑料桶。试验在日光温室中进行，22℃~28℃,16h光照条件下。
4.5调查
接种28d～35d后，检查感病品种Lee根部大豆胞囊线虫发育情况，当大豆胞囊线虫黄白色雌虫突出根表皮时，对所有鉴别寄主拔出大豆苗，取全根系，轻轻抖掉根上土，直接在根上计数大豆胞囊线虫雌虫，并计算雌虫指数。试验设置4次重复。
4.6鉴定有效性
当对照寄主Lee根上附着的雌虫大于30个时，结果有效，否则无效。4.7生理小种确定
生理小种确定根据雌虫指数(F1)划分。
雌虫指数(F1)计算如下：
FI=×100T(鉴别寄主单株平均寄生雌虫数目
FI=
×100
C(Lee68单株平均寄生雌虫数目)
(每个寄主根上雌虫平均数量)÷(Lee上的雌虫平均数量)×100
雌虫指数≥10%时为感，记作“+”，＜10%时为抗，记作“-”
根据Riggs等生理小种划分标准鉴定生理小种。见NY/T3059-2016附录A。
4.8结果记录和报告撰写
根据重复鉴定结果，写出正式鉴定报告，并附原始数据。
5鉴定记载
大豆抗胞囊线虫生理小种鉴定结果记载表按照见附录A.1。
6鉴定档案
应建鉴定档案，内容包括土壤采集、播种、移栽、秧苗管理、接种和调查等。档案保存3年以上，建档被查。
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附录A
（规范性附录）
A.1鉴定结果记载表
表A.1大豆抗胞囊线虫生理小种鉴定结果记载表
鉴别寄主
根系附着雌虫数
平均雌虫数
鉴定小种
重复
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Peking
I
II
III
Ⅳ
PI88788
I
II
III
Ⅳ
Pickett
I
II
III
Ⅳ
Pickett
I
II
III
Ⅳ
Lee
I
II
III
Ⅳ
注1：鉴定地点
注2：接种生理小种编号
注3：接种日期
来源
调查日期
鉴定技术负责人（签字）：