黑曲霉脂肪酶基因克隆及异源表达技术优化.docx

黑曲霉脂肪酶基因克隆及异源表达技术优化

目录

黑曲霉脂肪酶基因克隆及异源表达技术优化（1）．．．．．．．．．．．．．．．．4

一、内容概要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1脂肪酶概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.2黑曲霉脂肪酶的特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.3研究目的与价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

二、黑曲霉脂肪酶基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1基因组DNA的提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.2脂肪酶基因的PCR扩增．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.3基因的序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

2.4重组质粒的构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

三、异源表达系统的选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

3.1常见异源表达系统概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

3.2表达系统的筛选与比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

3.3表达系统的优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

四、黑曲霉脂肪酶基因异源表达的实现．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

4.1表达载体的构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

4.2重组蛋白的表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

4.3表达产物的鉴定与表征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

五、表达技术优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

5.1表达条件的优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

5.2发酵过程控制策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

5.3蛋白质纯化方法的改进．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

六、实验结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

6.1实验结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

6.2结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

七、讨论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

7.1研究成果总结．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

7.2技术优化对黑曲霉脂肪酶表达的影响分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

7.3未来研究方向与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

八、结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

8.1研究结论汇总．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

8.2研究成果的应用前景与价值评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

黑曲霉脂肪酶基因克隆及异源表达技术优化（2）．．．．．．．．．．．．．．．45

一、内容简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

（一）研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

（二）研究目的与内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

二、黑曲霉脂肪酶基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

（一）黑曲霉脂肪酶基因简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54

（二）基因克隆策略选择．．．．．．．．．．．．．．．．