DB45T 2034-2019 甘蔗茎尖脱毒组培苗繁育技术规程.docx
ICS65.020.01B34
DB45
广西壮族自治区地方标准
DB45/T2034—2019
甘蔗茎尖脱毒组培苗繁育技术规程
Technicalspecificationforsugarcanevirus-freetissuecultureseedlingfromshoottiprapidpropagation
2019-12-05发布2019-12-30实施
广西壮族自治区市场监督管理局发布
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DB45/T2034—2019
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准由广西壮族自治区糖业办公室提出并监督实施。本标准由广西糖业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所。
本标准主要起草人：刘丽敏、刘红坚、李松、何为中、刘俊仙、翁梦苓、卢曼曼、何毅波、张伟珍。
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DB45/T2034—2019
甘蔗茎尖脱毒组培苗繁育技术规程
1范围
本标准规定了甘蔗茎尖脱毒组培苗繁育技术的术语和定义、缩略语、实验室仪器设备试剂、培养基的配方及配置、茎尖培养、脱毒检验、继代增殖培养、生根培养、假植、假植苗质量要求及检验方法和假植苗包装、销售与运输。
本标准适用于广西境内甘蔗茎尖脱毒组培苗的繁育技术。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB19489实验室生物安全通用要求GB/T22278良好实验室规范原则
GB/T36829甘蔗宿根矮化病菌实时荧光PCR检测方法
NY/T1796甘蔗种苗
NY/T1804甘蔗花叶病毒检测技术规范
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
甘蔗茎尖脱毒shootapexvirus-free
利用甘蔗茎尖顶端分生组织及其周缘部分培养组培苗，而使其脱除花叶病、宿根矮化病等病原菌的方法。
3.2
外植体explant
从甘蔗腋芽苗中切取下来进行培养获得无菌苗的茎尖分生组织称为外植体。
4缩略语
MS：MS培养基（MurashigeSkoog(1962)）
PVP：聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpyrrolidone）ScMV：甘蔗花叶病(Sugarcanemosaicdisease)SrMV：高梁花叶病(Sorghummosaicvirus)
RSD：甘蔗宿根矮化病(Ratoonstuntingdisease)
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DB45/T2034—2019
5实验室、仪器设备、试剂
5.1实验室
应符合GB19489和GB/T22278规定。5.2仪器设备
主要的仪器设备如下:压力蒸汽灭菌器、恒温水浴锅、空调、超净工作台、体视显微镜（双筒解剖镜）、接种针、接种刀、长柄枪型镊子、封口机等。
5.3试剂
甘蔗茎尖脱毒组培苗繁育常用化学试剂见附录A。
6培养基的配方及配制
6.1配方
使用的培养基配方如下：
a)诱导分化培养基：MS＋6-BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L＋核黄素15mg/L～30mg/L＋蔗糖3%;
b)继代增殖培养基：MS＋6-BA0.5mg/L～1.5mg/L＋NAA0.05mg/L～0.10mg/L＋蔗糖3%;
c)生根培养基：MS＋NAA5mg/L～10mg/L＋蔗糖3％～7％。
6.2配制
6.2.1诱导分化培养基的配置
培养基的各个成分按6.1中a)的配方量取后，加水定容，用1mol/LNaOH或HCl将培养基的pH值调节在5.8～6.0，折长宽各4cm的四层滤纸放入培养瓶内，将培养基按每瓶10mL的量分装到培养瓶，以培养基不淹没滤纸为宜。
6.2.2继代增殖培养基的配置
培养基的各个成分按6.1中b)的配方量取后，加水定容，用1mol/LNaOH或HCl将培养基的pH值调节在5.8～6.0，将培养基按25mL/瓶的量分装至培养瓶。
6.2.3生根培养基的配置
培养基的各个成分按6.1中c）的配方量取后，加水定容，用1mol/LN