DB13_T1384.2-2011_饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定_河北省.docx
ICS65.120
DB13
B46
河北省地方标准
DB13/T1384.2—2011
饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定
Determinationofstrain/tetracycline/aureomycininfeed
河北省质量技术监督局
发布
DB13/T1384.2—2011
前
言
本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。
本标准由河北省质量技术监督局提出。
本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、河北医科大学、
北京出入境检验检疫技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。
本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、丛斌、杨立学、卢晓宇、吕品、沈磊、米振杰、贾茜、李
志平、马春玲、张敬轩、高振同、武英利。
I
DB13/T1384.2—2011
饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定
1
范围
本标准规定了饲料中土霉素、四环素、金霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定。
本标准的方法检出限：50μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682－1992，neqIS03696：1987）
3原理
试样提取液经离心后，上清液用OasisHLB固相萃取柱和阴离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱
4.40.4mol/L盐酸溶液：准确量取32.8mL盐酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。
4.5草酸。
4.60.01mol/L草酸甲醇溶液：准确称取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶
中。
4.8甲酸溶液：准确量取4mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀即可。
4.9土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度≥95％。
4.10土霉素、四环素、金霉素标准储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的土霉素、四环素、
金霉素、标准物质，分别用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备液。储备液贮存在-18℃冰柜中。
4.11土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液：根据需要吸取适量土霉素、四环素、金
霉素标准储备溶液，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液，基质混合标准
工作溶液在4℃保存，可使用三天。
OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水
1
DB13/T1384.2—2011
5仪器
5.1液相色谱-串联四级杆质谱仪，配有电喷雾离子源。
5.2分析天平：感量0.lmg和lmg各一台。
5.3旋涡混匀器。
5.4固相萃取仪。
5.5高速离心机。
5.6具塞锥形瓶：50mL。
5.7离心管：50mL，5mL。
5.8
氮吹仪。
5.9旋转蒸发器。
6
试样的制备
6.1提取
准确称取3.0g样品（准确至0.01g），置于50mL具塞锥形瓶中，加入甲醇10mL，旋涡混匀1min，
加入盐酸溶液（4.4）30mL，旋涡混匀1min，超声20min，移至50mL离心管中，5000r/min离心10
min，取上清液，待净化。
6.2净化
取10mL上清液与40mL水稀释混匀，再移入下接OasisHLB柱的贮液器中。溶液以小于1.0mL/min
的流速过柱，然后依次用甲醇-水溶液（4.9）淋洗，减压抽干20min。用草酸甲醇溶液（4.6）5mL洗
脱，收集洗脱液于40℃减压旋转蒸发至干,用1.0mL流动相溶解残渣，12000r/min离心10min，经0.45
μm有机滤膜过滤后，待测。
离子源：电喷雾离子源；
2
DB13/T1384.2—2011
表1
三种四环素族抗生素定性离子对、定量离子对
土霉素
四环素
金霉素
461/426
461/443
461/381
445/410
445/154
445/428
479/444
479/154
479/462
定性离子对/（m/z）
定量离子对/m/z）
461/426
445/410
479/444
7.1.3液相色谱-串联质谱测定
用土霉素、四环素、金霉素基质混合标准工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液溶度为
横坐标绘制标准工作曲线，用标准工