《基因工程的基本操作程序》学习要点.doc

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1.2基因工程的基本操作程序

【学习目标】

1.通过观察图片，阅读文本，能够简述基础理论研究和技术进步催化了基因工程；

2.通过查阅文献、师生交流，能够简述基因工程的原理和基本步骤。

【学习重点】

基因工程基本操作程序的四个步骤。

【学习难点】

1.从基因文库中获取目的基因。

2.利用PCR技术扩增目的基因。

【知识要点梳理】

一、基因工程的基本操作程序

1.目的基因的获取。

2.基因表达载体的构建。

3.将目的基因导入受体细胞。

4.目的基因的检测与鉴定。

二、目的基因的获取

1.目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。

2.基因文库

（1）基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。

2.

3.获取目的基因的方法

（1）从基因文库中获取目的基因

（2）利用PCR技术扩增目的基因

①PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

②过程：目的基因受热形成单链，与引物结合，在DNA聚合酶的作用下延伸形成DNA。

③方式：指数扩增＝2n（n为扩增循环的次数）。

（3）人工合成法：若基因较小，核苷酸序列已知，可以人工合成。

三、基因表达载体的构建

1.组成

2.功能：（1）使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代；

（2）使目的基因表达和发挥作用。

四、将目的基因导入受体细胞

1.转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

2.导入植物细胞

（1）方法：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法。

（2）农杆菌特点

①易感染双子叶植物和祼子植物。

②Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体DNA上。

3.导入动物细胞

（1）常用方法：显微注射技术。

（2）常用受体细胞：受精卵。

4.导入微生物细胞

（1）原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。

（2）对受体细胞的常用处理方法：用Ca2+处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（这种细胞称为感受态细胞）。

五、目的基因的检测与鉴定

1.

2.个体生物学水平上的检测与鉴定：

如一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后，是否赋予了植物抗虫或抗病特性，需要做抗虫或抗病的接种实验。