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基因工程的根本操作程序

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基因工程的根本操作程序

1.目的基因的获取

2.基因表达载体的构建

3.将目的基因导入受体细胞

4.目的基因的检测与鉴定.

基因操作的根本步骤

一、提取目的基因——供体生物细胞

将需要的基因从供体生物

的细胞内提取出来。

取出DNA

目前被较广泛提取用限制酶剪

使用的目的基因有：苏去多余部分

云金杆菌抗虫基因、人

胰岛素基因、人干扰素

基因、种子贮藏蛋白基限制酶

因、植物抗病基因等。目的基因

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获得目的基因的方法

1.从基因文库中获取目的基因

什么是基因文库？

什么是局部基因文库？

怎样从基因文库中得到我们所需的目

的基因？

目的基因的有关信息与什么相联系？

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获得目的基因的方法

2.人工合成基因法——PCR扩增技术

PCR(polymerasechainreaction)

——聚合酶链式反响

是一项再生物体外复制特定DNA片段

的核酸合成技术。通过此技术，可获

取大量的目的基因。

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PCR技术

•原理：

DNA双链复制的根本原理

•前提：

一段目的基因的核苷酸序列

•过程：

1.目的基因DNA受热变性，解链；

2.引物与单链互补结合；

3.合成链在DNA聚合酶作用下进行

延伸。.PCR扩增仪

基因操作的根本步骤

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心

使目的基因在受体细胞中稳定存在，

目的：

并且可以遗传给下一代，同时使目的

基因能够表达和发挥作用。

它们各自

所需物质：的作用是

什么?

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用与提取目的基因

相同的限制酶切割质

粒使之出现一个切口，

将目的基因插入切口

处，让目的基因的黏

性末端与切口上的黏

性末端互补配对后，

在连接酶的作用下连

接形成重组DNA分子。

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基因操作的根本步骤

三、将目的基因导入受体细胞——转化

基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草

杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。

用人工的方法使体外重组的DNA分子转移到

目的基因导入受体细胞后，