基因工程的基本操作程序.pptx

非编码区非编码区编码区RNA聚合酶结合位点外显子内含子终止子基因的结构启动子原核真核

原核细胞的基因结构(补充内容）非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①不编码蛋白质。：编码蛋白质,连续不间断编码区非编码区原核细胞的基因结构②调控遗传信息表达,上游有启动子，下游有终止子启动子

真核细胞的基因结构（补充内容）编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子启动子终止子编码区上游编码区下游真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子非编码序列：包括非编码区和内含子

原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较连续不连续编码区非编码

基因工程的基本操作过程

目的基因的获取1基因表达载体的构建(核心)2将目的基因导入受体细胞3目的基因的检测与鉴定4基因工程的基本操作程序

一、目的基因的获取PCR——聚合酶链式反应是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。

PCR技术原理：前提：原料方式：DNA复制一段已知目的基因的核苷酸序列以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）指数2n模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子结果：使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增

过程

(二)利用PCR技术扩增目的基因

一、目的基因的获取目的基因的mRNA单链DNA(cDNA）双链DNA(即目的基因)反转录合成1）反转录法：蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成2）化学合成：（二）人工合成的目的基因

一、目的基因的获取种类获取目的基因的根据：见课本P9从基因文库中直接获取1.基因文库：概念见P9基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类

基因组DNA文库与cDNA文库的比较基因组DNA文库cDNA文库

1、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG／TACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是①双链DNA分子为模板②ATGTG或TACAC模板链③四种脱氧核苷酸④四种核苷酸⑤DNA聚合酶⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物⑧温度变化⑨恒温A．①③④⑦⑨B．①④⑥⑦⑧C．②⑤⑥⑦⑨D．①③⑥⑦⑧D

2、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是A.540个B.8100个C.17280D.7560个B3、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是A化学合成法?B基因组文库法CcDNA文库法?D聚合酶链反应A

4、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③反转录法④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A．①②③④B．①②③C．②③④ D．②③D

4、目的基因主要是指_______________的结构基因。获得目的基因的常见方法有三种：（1）从基因文库中获取目的基因，根据基因的_________序列，基因在________上的位置，基因的________产物mRNA，基因的_______产物蛋白质等获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因，该技术是一项在________完成的核酸合成技术，前提条件是有一段已知目的基因的________序列，以便于合成_________。（3）如果基因较小且核苷酸序列已知，可以通过____________方法。编码蛋白质核苷酸染色体转录表达体外核苷酸引物人工合成

二、基因表达载体的构建1、目的使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。2、表达载体的组成a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因位于基因的首端,是mRNA结合位点位于基因的末端,终止转录检测目的基因是否导入受体细胞

质粒DNA连接酶二个切口两个黏性末端重组DNA分子（重组质粒）限制酶处理同一种四个切口获得目的基因DNA分子3、过程:

不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是：（1