基因工程基本操作程序2.pptx

济宁一中生物教研室 2010 .3 .3;;;2、目的基因的获得方法：;①从基因文库中获取目的基因：;②利用PCR技术扩增目的基因;③通过DNA合成仪直接人工合成;二、基因表达载体的构建;2、目的： ;启动子;;; 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法（感染双子叶植物和裸子植物，对大多单子叶植物没有感染力） 基因枪法（常用于单子叶植物） 花粉管通道法（转基因抗虫棉） 将目的基因导入动物细胞 显微注射技术（“超级小鼠”） ; 将目的基因导入微生物细胞 导入大肠杆菌的方法：钙离子处理法 首先用Ca2+ 处理细胞,以增大细菌细胞壁的通透性,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞. 第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程. 第三步目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 ;四、目的基因的检测与鉴定;2、层次：;检测是否插入了目的基因 原理：分子杂交技术 过程：将转基因生物的基因组DNA提取出来→标记目的基因作探针→使其杂交 检测是否转录出了mRNA 原理：分子杂交技术 检测是否翻译成蛋白质 原理：抗原--抗体杂交 个体生物学水平的检测 （做抗虫或抗病的接种实验） ;1.运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有（　） A.抗虫基因　　B.抗虫基因产物 C.新的细胞核　D.相应性状 2.转基因动物转基因时的受体细胞是（　） A.受精卵　　　B.精细胞　　　 C.卵细胞　　　D.体细胞;3.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人 的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是（　） A.大肠杆菌　 B.酵母菌 C.噬菌体　 D.质粒DNA