新麦草独脚金内酯合成相关基因CCD7的克隆及表达分析.docx

新麦草独脚金内酯合成相关基因CCD7的克隆及表达分析

目录

一、内容综述................................................3

1.研究背景与意义........................................4

2.主要研究内容与目标....................................5

二、实验材料与方法..........................................6

1.实验材料..............................................8

新麦草品种选择.........................................8

基因CCD7全长序列获取...................................9

限制性内切酶与连接酶..................................10

转化受体细胞..........................................11

抗性筛选与鉴定........................................12

2.实验方法.............................................14

基因克隆策略..........................................14

转化与表达系统构建....................................15

三、CCD7基因的克隆与序列分析...............................16

1.克隆过程.............................................17

引物设计与合成........................................18

PCR扩增与纯化.........................................19

连接与转化............................................19

菌落筛选与PCR鉴定.....................................21

2.序列分析.............................................21

DNA序列比对...........................................23

密码子使用频率分析....................................24

启动子与终止子预测....................................25

四、CCD7基因在小麦中的表达分析.............................26

1.表达载体构建.........................................27

显性表达载体的构建....................................28

内源基因的抑制策略....................................28

2.表达谱差异分析.......................................29

RNA提取与纯化.........................................30

数字表达谱数据获取....................................31

差异表达基因筛选......................................32

3.经济性状关联分析.....................................33

性状鉴定与数据收集....................................34

相关性分析与显著性检验................................35

五、CCD7基因功能验证.......................................36

1.草苷酸合成途径分析...................................36

草苷酸合成关键基因表达监测.....................