胆木异胡豆苷合成酶基因NoSTR1的克隆与表达分析.docx
胆木异胡豆苷合成酶基因NoSTR1的克隆与表达分析
目录
胆木异胡豆苷合成酶基因NoSTR1的克隆与表达分析（1）．．．．．．．．．．4
一、内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
（一）胆木异胡豆苷的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
（二）合成酶基因NoSTR1的研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
（三）研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
二、实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
（一）植物材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
（二）试剂与工具酶．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
（三）载体与宿主细胞．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
三、胆木异胡豆苷合成酶基因NoSTR1的克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
（一）基因序列的获取与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
（二）PCR扩增技术克隆基因．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
（三）克隆产物的鉴定与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
四、胆木异胡豆苷合成酶基因NoSTR1的表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．17
（一）表达模式的时空变化分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
（二）表达量与活性的关系分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
（三）影响因素对表达的影响分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
五、结果与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
（一）克隆结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
（二）表达分析结果讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
（三）研究限制与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
胆木异胡豆苷合成酶基因NoSTR1的克隆与表达分析（2）．．．．．．．．．26
基础研究概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
1.1胆木异胡豆苷的背景介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
1.2NoSTR1基因的功能与重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
1.3合成酶在生物合成途径中的作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
2.1胆木异胡豆苷合成酶基因的来源与获取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
2.2基因克隆与构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
2.3表达载体的构建与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
2.3.1表达载体的选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
2.3.2启动子与终止子的选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
2.3.3表达载体的验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
2.4表达系统的建立与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
2.4.1表达菌株的选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
2.4.2表达条件的优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
基因克隆与序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
3.1NoSTR1基因的克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
3.1.1克隆效率与纯度评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
3.1.2基因序列的初步分析．．．．．．．．