草果镉吸收与转运相关基因AtNRAMP6的克隆与表达分析.docx

草果镉吸收与转运相关基因AtNRAMP6的克隆与表达分析

目录

草果镉吸收与转运相关基因AtNRAMP6的克隆与表达分析（1）．．．．．．3

内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.2研究目的和意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

AtNRAMP6基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

2.1基因组DNA的提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

2.2PCR引物的设计与合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.3基因的克隆与测序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

AtNRAMP6基因表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

3.1表达分析前的准备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

3.2实时荧光定量PCR分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

3.3蛋白水平的表达验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

草果镉吸收与转运机制的研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

4.1AtNRAMP6基因在草果镉吸收中的作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

4.2草果对镉的转运机制探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

结果与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

5.1克隆结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

5.2表达分析结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

5.3草果镉吸收与转运机制研究结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

5.4结果比较与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

6.1研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

6.2研究创新点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

6.3展望与建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

草果镉吸收与转运相关基因AtNRAMP6的克隆与表达分析（2）．．．．．23

一、内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

1.2研究意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

1.3研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.2.1基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

2.2.2表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

2.2.3长期培养与遗传稳定性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

三、基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

四、基因表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

五、功能验证