01-Kil蛋白介导的大肠杆菌外泌表达系统.pdf

3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ISSN 0582 9879 ACTA BIOCHIMICA et BIOPHYSICA SINICA 2001 , 33 (5) : 537 - 541 CN 31 1300/ Q Kil 蛋白介导的大肠杆菌外泌表达系统 3 童 　芹　张惠堂 　杨运桂 　杨胜利 　龚　毅 ( 中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心 , 上海 200233 ) 2 2 2 2 摘要 　　利用大肠杆菌素释放基因 ( ) 能有效地增加细菌外膜通透性促进周质蛋白外泌的原理构建了含 基 kil 2 2 2 kil β 因的大肠杆菌外泌表达系统2 2 。将大肠杆菌本身的周质分泌蛋白2 2 内酰胺酶和异源周质分泌蛋白点状产气单胞菌脯 氨酰内肽酶作为报告蛋白 , 观察 Kil 蛋白对这两种通常极少分泌到胞外的周质蛋白胞外分泌的促进作用 。我们的 研究显示 : kil 基因表达时 ,β内酰胺酶的总活性较对照组提高 1 倍 , 胞外分泌活性较对照组提高近 4 倍 。脯氨酰 内肽酶的总活性较对照组提高 0. 8 倍 , 胞外分泌活性较对照组提高 3 倍 。 关键词 　　kil 基因 ; 胞外分泌 ;β内酰胺酶 ; 脯氨酰内肽酶 　　大肠杆菌是目前常用的基因工程菌之一 , 有着 子 , 氨苄青霉素抗性) , pWSK129 (pSC101 复制子 , ～ 高产、方便、廉价等优点[1 3 ] 。当重组蛋白质以分泌 卡那霉素抗性) 均由本实验室保存。pUC19 pep 表达的形式切除了信号