（正式版）H-Y-T 176-2014 海水中铁细菌的测定 MPN法（正式版）.docx
ICS07.060;13.060
Z17
中华人民共和国海洋行业标准HY/T176—2014
海水中铁细菌的测定MPN法
Determinationofironbacteriainseawater—MPNmethod
2014-06-25
发布
2014-12-01实施
国家海洋局发布
I
HY/T176—2014
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准由国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所提出。
本标准由全国海洋标准化技术委员会(SAC/TC283)归口。
本标准由国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所、浙江国华浙能发电有限公司负责起草。本标准主要起草人：李亚红、张益、陈冲、吴彭杰、周筝、张连涛、元昊、赵小芳、郭景静。
1
HY/T176—2014
海水中铁细菌的测定MPN法
1范围
本标准规定了海水中铁细菌的MPN测定方法。
本标准适用于海水及海水利用浓海水中铁细菌的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T16310.1—1996船舶散装运输液体化学品危害性评价规范水生生物急性毒性试验方法
3术语和定义
3.1
3.2
3.3
下列术语和定义适用于本文件。
铁细菌ironbacteria
一类能将溶于水中的棕色亚铁离子转变为不溶于水的褐色或黑色三氧化二铁水合物的细菌。
MPN法MPN(mostprobablenumber)method
应用多管发酵技术，采用概率理论估算细菌浓度的方法。
陈海水agedseawater
取自未污染海域，装入玻璃瓶后储放在暗处15d以上的海水。
4方法原理
本方法采用多管发酵技术，在(29±1)℃培养14d,如果试管中棕色消失而且形成褐色或黑色沉淀，表明阳性反应，采用MPN法对被测试样中的铁细菌进行计数。
5试剂与材料
本试验方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB/T试验所需试剂与材料如下：
6682中三级水规格的水。
a)硫酸镁；
b)硫酸铵；
c)磷酸氢二钾；
d)无水氯化钙，
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HY/T176—2014
e)硝酸钠；
f)柠檬酸铁铵；
g)硫代硫酸钠；
h)陈海水；
配制；i)人工海水：按GB/T16310.1—1996
配制；
j)氢氧化钠溶液：160g/L;
k)盐酸溶液：1+11;
1)牛皮纸。
6仪器与设备
6.1无菌箱(室)或超净工作台。
6.2蒸汽压力灭菌器。
6.3生化培养箱：(29±1)℃。
6.4电热干燥箱：温度控制范围60℃~280℃,允差±2℃。
6.5电热恒温水浴锅：恒温范围37℃~100℃,允差±1℃。
6.6天平：称量范围0g～220g,感量0.01g。
6.7冰箱。
6.8振荡器。
6.9刻度吸管或移液器：1mL、10mL。
6.10量筒：500mL、1000mL。
6.11烧杯：1000mL。
6.12无菌试管：直径18mm,长度180mm,配硅胶塞。
6.13无菌刻度吸管或移液器和Tip头。
6.14无菌采样瓶：广口玻璃瓶或聚丙烯(PP)塑料瓶。
注：6.12～6.14中的试管、硅胶塞、刻度吸管或移液器和Tip头、采样瓶均经蒸汽压力灭菌器(121±1)℃灭菌20min后，烘干冷却备用。
6.15试管架。
6.16pH计或精密pH试纸(6.4～8.0)。
7试验前准备
7.1培养基的配置
7.1.1成分
成分如下(每升中的含量):
a)硫酸镁
b)硫酸铵
c)磷酸氢二钾
d)无水氯化钙
e)硝酸钠
f)柠檬酸铁铵
0.50g;
0.50g;
0.50g;
0.20g;
0.50g;
10.00g。
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7.1.2制法
将7.1.1a)～f)试剂溶解到500mL海水和500mL蒸馏水配制的混合水中，用氢氧化钠溶液(160g/L)或盐酸溶液(1+11)调节pH至6.8±0.2,并分装在试管(6.