基因工程课件-第四章 基因的转移与重组体的检验.pptx

外源DNA;1.转化（transformation);使用丧失了限制体系的大肠杆菌。如K12系列的大肠杆菌。;;;外源载体DNA（携带插入基因片断）进入感受态菌体细胞里的过程。;;电穿孔转化;LB培养受体菌至OD600=0.5-0.6;细菌原生质体的转化;转化的原理与技术;转化的原理与技术;转化的原理与技术;转化率;转化率;转化率;转化率;转化率;转化率;供受体的比例：;转化细胞的扩增;转化细胞的扩增;小结;二 转化子的筛选和鉴定（检）;根据重组体克隆的表现型特征进行选择的方法。;pBR322质粒上有两个抗菌素抗性基因，Tetr和Ampr。 Tetr上有插入位点BamH I和Sal I; Ampr上有插入位点Pst I。当由外源DNA插入后就会造成抗菌素抗性失活。;载体遗传标记检测;四环素：;负选择：;抗菌素失活选择过程;载体遗传标记检测;载体遗传标记检测; ?-半乳糖苷酶显色反应选择法;选择过程;克隆DNA序列检测;克隆DNA序列检测;利用带插入片段的重组载体分子量比野生型载体分子量大。;克隆DNA序列检测;克隆DNA序列检测;克隆DNA序列检测;克隆DNA序列检测;克隆DNA序列检测;;非放射性标记;克隆DNA序列检测;克隆DNA序列检测;酶：辣根过氧化物酶（HRP），碱性磷酸梅（AP）;克隆DNA序列检测;克隆DNA序列检测;外源基因产物检测;外源基因产物检测;放射性抗体检测法过程;把非放射性抗体加到平板培养基中，当插入基因的表达产物被细菌分泌到菌落周围时，就会与抗体反应形成“沉淀圈”。;外源基因产物检测