菜豆植物凝集素对肿瘤细胞增殖的抑制作用.doc

菜豆植物凝集素对肿瘤细胞增殖的抑制作用 　　摘 要 从已测定凝集素含量的56个菜豆品种中筛选具有代表性的菜豆品种，分离纯化菜豆植物凝集素，MTS法分析其对人乳腺癌细胞（MCF7、231）及肝癌细胞（HEPG2）生长的影响。结果显示菜豆植物凝集素能抑制这三种肿瘤细胞的增殖，且抑制作用呈明显剂量-效应关系。说明菜豆植物凝集素具有一定的体外抗肿瘤活性，可进一步筛选高凝集素含量菜豆品种作为分离纯化凝集素的原料，为抗肿瘤药物的研究奠定实验基础。 　　关键词 菜豆植物凝集素 MTS分析 抗肿瘤 　　中图分类号：Q946 文献标识码：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdkz.2016.09.079 　　Analysis on Inhibition of Tumor Cell Proliferation 　　Induced by Kidney Bean Lectin 　　JIN Wenyan，WEI Siyu， LI Jianan 　　Department of Biotechnology， School of Life Science， Jianghan University， Wuhan， Hubei 430056） 　　Abstract The kidney bean lectin was purified by methods of homogenization， centrifugation， ultrafiltration and ammonium sulfate precipitation. Two human breast cancer cell line （MCF7， 231） and one liver cancer cell line （HEPG2） were cultured in vitro and treated with kidney bean lectin. MTS assay was used for detecting the inhibition of tumor cell proliferation.The results showed that there was a significant difference in the inhibition ratio of proliferation after treated by kidney bean lectin. The result also indicated that the inhibition was dose dependent. This study will provide a theoretical basis and technical methods for the genetic improvement of kidney bean quality and utilization. 　　Key words kidney bean lectin； MTS assay； anti-tumor 　　凝集素是一种可从植物、无脊椎动物和高等动物中提取的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球（含血型物质），故称其为凝集素。有报道指出，某些凝集素在动物体内对各类肿瘤均有抑制作用；另有报道，从刀豆种子中提取的一种新型凝集素具有潜在的抗肝癌作用。多种研究表明存在于植物中的凝集素具有抑制肿瘤细胞增殖活性。 　　在前期研究中，我们已经对56个品种的菜豆植物凝集素进行活性浓度测定，并成功分离纯化到菜豆植物凝集素，本研究拟通过MTS法检测已分离的菜豆植物凝集素对三种肿瘤细胞生长的影响，判断其是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用，为菜豆植物凝集素的应用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞株 　　人乳腺癌细胞（MCF7），人肝癌细胞（HEPG2），人乳腺癌细胞株（231）。 　　1.2 试剂 　　菜豆植物凝集素（1mg/ml），RPMI-1640培养基，胎牛血清，青、链霉素（1%），RPMI-1640完全培养液（RPMI-1640+10%胎牛血清+1%青、链霉素）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 肿瘤细胞培养 　　三种贴壁细胞使用RPMI-1640完全培养液，于37.0??C、5%CO2培养箱中培养。细胞贴壁生长，取对数生长期细胞用于实验。 　　1.3.2 MTS法检测活细胞数 　　将用以上方法培养获得的细胞以2.0x104个/ml密度接种于96孔培养板中，每孔0.1ml，于37.0??C、5%CO2培养箱中培养24h后，加入浓度分别为1mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml、0.0001mg/ml、0.00001mg/ml的菜豆凝集素0.1ml。每