红景天酪醇对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用.doc

精品论文 参考文献 红景天酪醇对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用 邹洪霞1 张淑芹2 张福明3 陈显秋3 1长春市疾病预防控制中心 130006;2吉林大学再生医学科学研究所 130021;3吉林大学第一临床学院 130012 【中图分类号】R737.33【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）18-0162-02 【摘要】目的 研究红景天酪醇对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的抑制作用。方法 采用集落形成实验和MTT实验研究红景天酪醇对体外培养Hela细胞的杀伤作用。结果 红景天酪醇明显影响Hela细胞的集落形成，抑制Hela细胞的活性和功能状态。结论 红景天酪醇对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用，提示红景天酪醇可能对宫颈癌具有一定的防治作用。 【关键词】红景天酪醇 宫颈癌 Hela细胞 高山红景天为景天科多年生草本植物，种类多，野生资源丰富，药理作用广泛。具有增强免疫，抗疲劳、耐缺氧，抗病毒，抗辐射，抗肿瘤等多种功效[1]。其中红景天甙和红景天酪醇为红景天中公认的主要活性成分，对红景天的疗效具有代表性作用[2]。本实验对红景天酪醇的抗肿瘤作用进行了初步研究，证明了红景天酪醇对体外培养的人Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用。 1 材料和方法 1.1材料 红景天酪醇由本实验室提纯，人宫颈癌Hela细胞、人羊膜细胞FL由本实验室保存。 1.2 药物的毒性实验 将药物灭菌后用含2%小牛血清的细胞维持液分别配制成以下浓度：2500mu;g/ml、 2000mu;g/ml、1500mu;g/ml、1000mu;g/ml、500mu;g/ml、100mu;g/ml、50mu;g/ml、25mu;g/ml，传代人羊膜细胞FL于96孔培养板，待长成单层后加入上述浓度的药物，24h后观察结果 。求出药物的最大无毒浓度和半数致死浓度。 1.3 集落形成实验[3]取对数生长期的Hela细胞接种于75mm平皿内(细胞悬液中单个细胞比例gt;95%)，每皿800个细胞，培养24小时后分别加入上述3个浓度药物，继续培养9天，取出平皿倾弃培养液，pH6.18磷酸盐缓冲液洗涤2次，甲醇固定20分钟，10%Giemsa染色20分钟，去离子水冲洗，晾干，在解剖镜下计数每皿大于20个细胞以上的集落数，计算集落形成率，集落形成抑制率。 抑制率=空白对照组集落数-实验组集落数 / 空白对照组集落数times;100%。 1.4 MTT实验[4]用含10%小牛血清的RPMI1640培养液将Hela细胞配成悬液（1times;105个/ml）加入96孔板，200mu;l/孔。实验组加入不同浓度的红景天酪醇，分别培养24、48、72小时，在额定的时间吸去培养液，换上无血清的RPMI1640培养液，并加入MTT液20mu;l，继续培养4小时，弃去培养液，每孔加入酸化异丙醇200mu;l，用酶标仪测570nm下的吸光值（A）。细胞生长抑制率=（1-实验组平均A值/对照组平均A值）times;100%。 2 结果 2.1药物的毒性实验结果，如图1所示。 从图中可以看出，红景天酪醇对羊膜细胞的最大无毒剂量为 500mu;g/ml，半数中毒剂量为1000mu;g/ml，因此实验时我们选择500mu;g/ml、300mu;g/ml、100mu;g/ml为实验浓度。 2.2药物的集落形成实验结果 见表1 表1 红景天酪醇对Hela细胞集落形成的影响 组别 剂量（ug/ml） 集落数 对 照 组 94.2plusmn;6.08 实验1组 100ug/ml 30.7plusmn;0.76 实验2组 300ug/ml 23.2plusmn;1.26 实验3组 500ug/ml 16.3plusmn;0.79 注：与对照组比较，﹡P＜0.01 从表1 中可以看出，红景天酪醇能够有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，并且随着药物浓度的增加，Hela细胞的集落数逐渐减少。 2.3 MTT实验结果 结果 见表2 ，A值与细胞存活数存在线性关系，实验组A值明显低于对照组（P＜0.01），且随着药物浓度的增加而降低。 表2 .红景天酪醇对Hela细胞生存率的影