干扰素α对转化生长因子β1刺激肝星状细胞表达Smad3及Smad7的影响.pdf

·中文论著摘要· 干扰素一仅对转化生长因子．P-刺激肝星状细胞 表达Smad3及Smad7的影响 目 的 肝纤维化是多种慢性肝病共有的组织学变化，肝星状细胞(HSC)的活化和增 殖是肝纤维化形成的关键和中心环节。转化生长因子一Pl(TGF-P1)是调控肝纤维化 发生、发展的核心物质。Smads蛋白是TGF．p信号转导过程中最重要的胞内效应 信号转导通路中Smad蛋白家族是否有影响尚未见报道。本研究通过检测IFN．a 对TGF．Pl刺激体外培养的HSC表达Smads蛋白的影响，阐明其抗肝纤维化机制， 为临床肝纤维化的药物治疗提供更多的理论依据。 材料与方法 一、实验材料 1、大鼠肝脏星状细胞株(r-HSC99) 由北京大学人民医院冷希圣教授惠赠，由中国医科大学附属盛京医院感染科研 究室保存。r-HSC99是经长期培养，传代后自发产生的，符合HSC的自然特征， 是研究肝纤维化理想的实验模型。 2、主要试剂 TGF．Bl；重组人干扰素．a 录试剂盒；羊抗大鼠Smad3多克隆抗体；羊抗大鼠Smad7多克隆抗体。兔抗山羊 IgG抗体。 二、实验方法 别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫印迹(Western blotting)方法， 及蛋白变化。 三、统计学处理 应用SPSSl3．0软件进行分析，数据以均数4-标准差表示，各组之间是否存在显 著性差异分析采用LSD．t检验，以P0。05为差异有统计学意义。 实验结果 1、HSC表达Smad3、Smad7mRNA的结果 0小时的Smad3 24小时Smad3 0．579+0．024。在TGF．Dl作用下，随着时间的增加，两组Smad3 町刀| 、l…i 加，在8小时达到高峰，之后开始下降，与0小时相比，Smad3mRNA在4、8、＼ 孑徽饧 间相比，IFN—Gt+TGF．pl组Smad3 一jf 组差异均有统计学意义(P0．05)。 0小时的Smad7 24小时Smad7 mRNA表达均增加，在8小时达到高 0．631士0．088。随着时间的增加，两组Smad7 mRNA在4、8、16小时组差异均有统 峰，之后开始下降，与O小时相比，Smad7 组Smad7 (P0．05)。 2、HSC表达Smad3、Smad7蛋白的结果 2 O小时的Smad3蛋白／p—actine值为0．291士0．031，TGF．pl组2、4、8、16、24 0．556+0．034、0．395a：0．022；IFN—tl+TGF．pl组2、4、8、16、24小时Smad3蛋白／p—actine 值分别为0．307+0．072、0．390士0．029、0．45 1士0．027、0．433+0．022厂、 在8小时达到高峰，之后开始下降，与0小时相比，Smad3蛋白在4、8、16、24 统计学意义(PO．05)。 0．330士0．042、0．259+0．0271 82士0．011、0．303士0．03 值分别为o．1 1、0．528+0．049、0．437士0．037／、1 之后开始下降，与O小时相比，Smad7蛋白在4、8、16、24小时组差异均有统