嗜热链球菌冻干保护剂保护作用的研究蒲丽丽.doc

嗜热链球菌冻干保护剂保护作用的研究_蒲丽丽 DOI:10.13684/ki.spkj.2007.07.009 工艺技术 嗜热链球菌冻干保护剂 保护作用的研究 蒲丽丽１，刘宁２，霍贵成２ （１．江苏畜牧兽医职业技术学院，泰州２２５３００； ２．东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨１５００３０） 摘要：冷冻干燥前在菌液中加入保护剂，可提高乳酸菌的冻干存活率。对多种保护剂的保护作用做了比较，其中海藻糖的保护效果最好；在扫描电镜下观察了冻干后的嗜热链球菌，加海藻糖保护的菌体细胞饱满、完整，对照则有变形和塌缩，该结果较为直观地揭示了海藻糖对菌体细胞的保护作用。关键词：嗜热链球菌；冻干；保护剂中图分类号：ＴＳ２０１．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５－９９８９（２００７）０７－００３２－０３ ＴｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｏｆＳ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｌｕｓａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎ ＰＵＬｉ－ｌｉ１，ＬＩＵＮｉｎｇ２，ＨＵＯＧｕｉ－ｃｈｅｎｇ２ （１．ＪｉａｎｇｓｕＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＣｏｌｌｅｇｅ，Ｔａｉｚｈｏｕ，２２５３００；２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ，ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｓｏｆＬａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｎｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｔｈｅｐｒｏ－ｔｅｃｔａｎｔｓａｄｄｅｄ．Ａｎｄｔｈｅｔｒｅｈａｌｏｓｅｈａｓｔｈｅｂｅｓｔｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｓｅｂａｃｔｅｒｉａｂｏｄｉｅｓ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｏｔｈｅｒ１５ｋｉｎｄｓｏｆｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ．Ｔｈｅｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｅｄｃｅｌｌｓｏｆｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｌｕｓｗａｓｆｕｌｌａｎｄｕｎｆｒａｇｉｓａｂｌｅｒ，ｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅ，ａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｃｅｌｌ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｌｕｓ；ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ；ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ ｗｈｉｃｈｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｓｃａｎｎｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏ－ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ． Ｂｕｔｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｗａｓ ｓｈａｐｅｃｈａｎｇｅｄａｎｄｃｏｌｌａｐｓｅｄ．ＡｌｌｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｒｅｈａｌｏｓｅｔｏｔｈｅｂｏｄｉｅｓｏｆＬａｃｔｉｃ 随着乳酸菌对人体健康有益作用机理的深入研究和揭示，乳酸菌产品逐渐受到人们的重视。乳酸菌菌粉是生产这些产品的重要原料，而常用于制备乳酸菌菌粉的方法是真空冷冻干燥法（简称冻干）［１］。影响乳酸菌冻干效果的因素有很多，为了提高乳酸菌冻干后的存活率，本课题主要选择了保护剂进行了研究，并对保护剂的保护机理进行了探讨，这对乳 酸菌菌粉的生产及菌种的冻干保存均具有一定的理论与实践意义。 １１．１ 材料与方法材料菌种 嗜热链球菌（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）：东北农业 １．１．１ 大学乳品科学教育部重点实验室分离保存，经多次 收稿日期：２００７－０１－２２基金项目： 十五”国家重大科技专项（２００２ＢＡ５１８Ａ０９）。“ 作者简介：蒲丽丽（１９７８－），女，河北沧县人，硕士，助教，研究方向为食品科学。 ３２ Ｎｏ．７． 工艺技术 传代遗传性状稳定。 表２ 序号 嗜热链球菌冻干保护剂的多重比较结果（ｎ＝３） 保护剂名称海藻糖蔗糖麦芽糖乳糖葡萄糖半乳糖葡聚糖谷氨酸赖氨酸甘油甘露醇 保护剂溶液浓度（％） １．１．２１．１．３ 培养基菌种继代和计数选择ＭＲＳ培养基［２］， 海藻糖：纯度≥９９％，南宁中诺 冻干存活率（％） 稀释液用于稀释涂布菌落计数。 试剂和仪器 生物工程有限责任公司；低温冷冻离心机：上海离心机械研究所；ＬＧＪ－１冷冻干燥机：上海医用分析仪器厂；ＪＦＣ－１６００离子溅射镀膜仪、ＪＳＭ－５６１０ＬＶ扫描电镜：日本ＪＥＯＬ公司。 １２３４５６７８９１０１１１２１３１４１５１６ ５５５５５５５２２５５５５５５－ ７６．３７ａ６２．５３ｂ６０．２５ｃ５８．０４ｄ４２．７０ｈ４０．５１ｉ４０．３９ｉ３７．７６ｊ３６．１６ｊ４５．７４ｇ４２．５２ｈ３５．２７ｋ３２．８６ｌ５１．４１ｆ５６．２４ｅ３．１５ｍ １．２１．２．１ 方法 菌种的培养和收集将单个菌落接入ＭＲＳ液 体培养基，经初次、二次扩培至稳定期前期，嗜热链球菌１０ｈ收获，４、８０００ｇ／１５ｍｉｎ