海藻多糖对HL-60细胞体外增殖的影响.doc

　　海藻多糖对HL-60细胞体外增殖的影响 作者：林新梅 王国祥 陆羡 唐慎华 【关键词】 海藻 【摘要】目的探讨海藻多糖对人HL-６０细胞增殖的影响。方法采用集落培养、MTT、形态观察等方法，研究海藻多糖对(HL-６０）体外增殖的影响。结果海藻多糖对体外培养的HL-６０细胞的抑制作用随时间和浓度的增加而增强，MTT结果示当浓度为800　μｇ／ｍｌ，作用48　ｈ时抑制率为(51.30±３.１０）％。结论海藻多糖体外可抑制HL-６０细胞增殖，提示其在抗肿瘤方面有一定的开发应用前景。 【关键词】海藻多糖；HL-６０细胞；增殖 【Abstract】ObjectiveTo explore the effect of seaweed polyaccharide on the proliferation in the HL-６０ cell line.MethodThe MTT,clone forming approaches and cell morphology were adopted.ResultsSeaweed polyaccharide can inhibit the proliferation of HL-６０ cells in a dose- and time-dependent manner in a certain range of dose (0～８００μｇ／ｍｌ）．After being treated with the polysaccharide (800 μｇ／ｍｌ） for 48 h,the inhibited rate is (51.30±３.１０）％．ＣonslusionThe seaweed polysaccharide can inhibit the HL-６０ cell proliferation,suggesting it can be used as an antileukemia drug. 【Key words】seaweed polysaccharide,HL-60 cell,proliferation 多糖在细胞的生命活动中起着重要作用，它参与了细胞的生长、分化、衰老和死亡过程。我国传统中医常用马尾藻等治疗乳腺癌与子宫癌,国外也开展了使用海藻多糖进行肿瘤防治的研究。本文采用由湛江产马尾藻中提取的海藻多糖研究其对HL-６０细胞增殖的影响。 1材料与方法 １．１试剂与仪器海藻多糖(广东医学院刘秋英硕士惠赠)，RPMI-１６４０培养基(Gibco Co，ＵＳＡ)，四甲基偶氮唑(MTT，Sigma公司)，Hoechst 33258(Sigma公司)，碘化丙啶(PI，Sigma公司)，4000　ｍＰａ．ｓ甲基纤维素(Sigma公司)。仪器：OLYMPUS IMT-型倒置相差显微镜(Japan)，丹尼酶标仪(Denmark)，SW-ＣＪ-ＩＦＤ医用净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)，SHZ-ＬＡＢ培养箱(UＳＡ）。 １．２方法 １．２．１细胞培养：HL-６０细胞株由广东医学院生化教研室提供。采用含10%新生牛血清终浓度为100 U／ｍｌ青霉素、链霉素的RPMI 1640液体培养体系，置37、5%ＣＯ２恒温培养箱中培养，隔天换液一次。实验选用对数生长期细胞。 １．２．２MTT抑制实验：参照文献［１，２］，将细胞以2×１０５／ｍｌ密度接种于96孔培养板中，加入不同浓度的药物，置37、5%ＣＯ２孵箱中分别培养24　ｈ、４８　ｈ、７２　ｈ后，每孔加入MTT(5　ｍｇ／ｍｌ）20　μｌ，继续培养4　ｈ，加入MTT裂解液(20%SDS＋５０％ＤＭＦ＋３０%Ｈ２Ｏ）１００　μｌ，３７、５％ＣＯ２孵箱中孵育8　ｈ，酶标仪检测各组细胞的A630／Ａ５７０值，计算抑制率(IR)。抑制率(IR)＝(１－用药组A值／对照组A值)×１００%。 １．２．３半固体培养：培养体系为2×１０２／ｍｌ细胞，RPMI 1640培养基，30%新生牛血清，不同浓度的药物，0.9%甲基纤维素，分别种入24孔板中，每孔1.5 ｍｌ，重复3孔，置37、５％ＣＯ２孵箱中培养，于第7天计算细胞集落数，以每团大于50个细胞为一个集落。 1.2.4形态学观察：培养体系为2×１０５／ｍｌ细胞，RPMI 1640培养基，马尾藻多糖终浓度分别为0(对照)、300、５００、８００　μｇ／ｍｌ，加入24孔板中，每孔2　ｍｌ，重复3孔，分别在1～５ d，于倒置显微镜下观察细胞形态变化，并拍照。 1.2.5统计处理:本实验数据资料用ｘ±ｓ表示，使用SPSS10.0统计软件进行统计描述，采用SNK-q检验。 ２结果 ２．１MTT结果以不同浓度(0、５０、１００、２００、４００、８００　μｇ／ｍｌ)的海藻多糖作用于HL-６０细胞24