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α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞增殖影响【中图分类号】R96 【文献标识码】 A 【文章编号】1672-3873（2011）03-0002-02 【摘要】目的 观察α-ZAL对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的作用。方法 酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞;应用MTT法测定成骨细胞增殖。结果 α-ZAL能促进大鼠颅骨成骨细胞增殖，最佳浓度为10-7mol/L和10-10mol/L。结论 α-ZAL可促进成骨细胞增殖和分化。 【关键词】α-玉米赤霉醇；细胞培养；成骨细胞 Effect of α-ZAL on osteoblasts cultured in vitro Gao Wen,Duan Fei1, Li Shaochun , et al. (College of Basic Medical Science of Hebei University，Baoding 071000，China) [Abstract]Objective: To investigate the effect of Effect of α-ZAL on osteoblasts cultured in vitro. Methods: Osteoblasts were obtained from the calvaria of newborn SD rats with enzymatic digestion method. The effect of α-ZAL on the proliferation of osteoblasts was determined by MTT assay. Result: α-ZAL increased osteoblastic proliferation at concentration of10-7mol/L, 10-10 mol/L. In this two concentration, they can inhibit osteoblast death.α-ZAL can promote the proliferation of osteoblasts. [KEY WORDS] α-ZAL; cell culture; Osteoblast; α-玉米赤霉醇（α-ZAL）是天然内源性植物激素玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的还原产物，属于二羟基苯酸内酯类化合物，具有促生长效应，与高等植物的发育有关，广泛存在于豆类、谷物等多种植物中[1]。α-ZAL结构与雌激素非常近似，初步的实验研究[2-3]发现，它具有与雌二醇类似的抗动脉粥样硬化及抑制组织因子分泌等作用，可产生心血管保护效应，同时对于由切除卵巢及由β淀粉样蛋白所致神经细胞损伤，对模拟阿尔茨海默氏病(AD)模型小鼠均有保护作用，作用与雌二醇相似。由于其结构与雌激素非常近似，其生物功能也同雌二醇相似，所以植物雌激素α-玉米赤霉醇可能对于绝经后骨质疏松症能产生雌激素样治疗作用。本研究将通过对体外成骨细胞的培养来探讨α-ZAL对成骨细胞增殖、分化以及凋亡等各方面的影响。 1实验材料与方法 1.1 试剂与药物17β雌二醇购自SIGMA公司、α玉米赤霉醇为DR. ehrenstorfer Gmbh 公司产、碱性磷酸酶测定试剂盒购自保定长城临床试剂有限公司，二甲基亚砜（DMSO）为AMRESCO公司产，胰蛋白酶为AMRESCO公司产、Ⅱ型胶原酶购自SIGMA公司。 1.2 动物SD孕鼠（河北医科大学动物中心提供）合格证编号：1004078 1.3 实验方法 1.3.1 大鼠成骨细胞的分离培养 取一日龄SD大鼠十只，断颈椎处死后，放入75%的酒精中，10分钟，酒精中取出小鼠，取下头盖骨; 用PBS洗涤头盖骨两次;于青霉素小瓶内将头盖骨剪成泥状，加入0.25%胰蛋白酶37℃消化20min后，用PBS洗涤，吹打沉淀，吸弃上清液;加入0.1%胶原酶37℃消化1h后，加细胞培养液，吹打均匀;重复一次，于离心机以1000rpm的速度，离心 15min ,使细胞沉淀，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液培养, 24 h后换液,以后隔日换液1次。培养至第4-7天,细胞长成致密单层,铺满培养瓶底,进行传代。 1.3.2成骨细胞鉴定:采用钙钴法碱性磷酸酶(ALP)染色进行成骨细胞鉴定。ALP阳性结果为成骨细胞胞浆呈灰黑色。 1.3.3 成骨细胞增殖活性检测（MTT法）将第3代成骨细胞传代接种于96孔板，细胞密度为5×104个/ml，以100μL /孔加入96孔板，细胞贴壁后，除去上清液，每孔分别加入α-ZAL终浓度各为10-5mol/L，10-6 mol/L，10-7 mol/L，10-