姬松茸粗多糖对hl-细胞增殖、凋亡及nf-κb活性影响.docx

学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。本论文属于：保密（），在年解密后适用本授权声明。作者签名：不保密（）。（请在以上括号内打“√”）导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要背景及目的急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)是一种以骨髓中大量的异常早幼粒细胞积聚，并伴有严重出血倾向为特征的白血病类型，在 FAB 分型中属 M3 型急性髓系白血病，常伴有 t(15;17) (q22;q12)染色体易位所致的 PML-RARα融合基因出现。在目前的治疗中，以全反式维甲酸和砷剂化疗为主，疗效较好，但同时也有比较严重的毒副作用，如维甲酸综合征及砷剂的毒性作用。因此寻找高效低毒、副作用少的药物对 APL治疗很有必要。姬松茸学名agaricus blazei murrill（ABM），又称巴西蘑菇，是一种药食皆用的大型真菌。可以提高机体免疫力，常作为一种保健食品。目前研究显示姬松茸提取物姬松茸粗多糖对人肝癌、结肠癌、前列腺癌等实体瘤具有抑制增殖及诱导凋亡作用。NF-κB是一组作用广泛的真核细胞转录因子,参与细胞内信号传递，调控多种基因的表达。NF-κB在多种实体瘤细胞中都有异常活化表达，有研究表明抑制NF-κB的异常激活，可以促进实体瘤细胞凋亡。急性髓系白血病造血干细胞中 93% 的细胞NF-κB异常活化表达。本次研究通过体外培养急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞，研究姬松茸粗多糖对HL-60细胞增殖、凋亡的影响，以及对NF-κB活性的影响。为姬松茸粗多糖应用于急性早幼粒细胞白血病治疗提供了实验依据以及新的治疗思路。材料和方法1.急性早幼粒细胞白血病细胞株 HL-60 细胞在含 10% 胎牛血清，100 U/mL青霉素和100 U/mL链霉素的 RPMI-1640培养基中悬浮培养。2.在培养 HL-60细胞过程中加入 ABM 粗多糖，使得 ABM 粗多糖终浓度为 1 mg/mL、2mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL。分别培养 HL-60 细胞 12 h、24 h、48 h，以不含 ABM 粗多糖的培养基培养 HL-60 细胞做为对照组；用 WST-1 法检测 ABM 粗多糖对 HL-60 细胞增殖的影响；用流式细胞分析仪检测 ABM 粗多糖对 HL-60 细胞凋亡的影响；用免疫荧光法检测 ABM粗多糖对 HL-60 细胞 NF-κB活性的影响。I汕头大学医学院硕士学位论文结果1.ABM粗多糖对 HL-60 细胞增殖的影响：用含不同浓度 ABM 粗多糖（1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL）的培养基分别培养 HL-60 细胞 12 h、24 h、48 h。①培养 12 h 后，10 mg/mL 组对 HL-60 细胞增殖有抑制作用（P0.05）；②培养 24 h 后，2 mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL 组对 HL-60 细胞增殖有抑制作用，且随着浓度增加抑制作用也有增强的趋势（P0.05）；③培养 48 h 后，1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL 各组对 HL-60 细胞增殖有抑制作用，随着浓度增加抑制作用也有增强的趋势（P0.05）。提示：在一定浓度范围内，ABM 粗多糖以剂量依赖方式抑制 HL-60 细胞增殖（P0.05）。2.ABM 粗多糖对 HL-60 细胞凋亡的影响：用含不同浓度 ABM 粗多糖（1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL）的培养基分别培养 HL-60 细胞 12 h、24 h、48 h 后，HL-60 细胞早期凋亡率均较各自对照组增加（P0.05）。①培养 12 h 后，10 mg/mL 组较其他浓度组早期凋亡率增加（P0.05）。而 1-5 mg/mL 组间早期凋亡率无差异；②培养 24 h 后，1-10 mg/mL组均使 HL-60 细胞早期凋亡率增加，且随着浓度增加，早期凋亡率也增加（P0.05）；③培养 48 h 后，1-5 mg/mL 组使 HL