第二十一章 兔外周血淋巴细胞分离液说明书.PDF

兔外周血淋巴细胞分离液说明书 【产品规格】 200ml/Kit 【产品组成】 为方便广大用户使用，试剂内容如下： 名称 产品编号 规格 A 兔外周血淋巴细胞分离液 200ml B 样本稀释液（赠品） 2010C1119 200ml C 清洗液（赠品） 2010X1118 200ml D 说明书 1份 【实验前准备】 A．适用仪器 最大离心力可达1200g的水平转子离心机 B．耗材 产品名称 产品货号 产地 15ml离心管散装 339650 美国 NUNC 15ml离心管架装 339651 美国 NUNC 50ml离心管散装 339652 美国 NUNC 50ml离心管架装 339653 美国 NUNC 无菌胶头滴管或塑料滴管 【检验方法】 全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。 首先取抗凝血按体积比 1:1的比例与样本稀释液（产品编号：2010C1119）混匀，根据 稀释后的样本量大小，分以下两种情况： 情况 A：稀释后的血液样本量小于 5ml时，实验方法如下： 1.取一支15ml离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。 2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min （注： 根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离 心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。 3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴 细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。 4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中 加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。 5. 250g，离心 10min。 6.弃上清。 7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。 8. 250g，离心 10min。 9.重复6、7、8，弃上清后以 0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。 情况 B：稀释后的血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下： 1.取一支适当的离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液。 2.将经稀释后的血液样本小心加于分离液之液面上，550-650g （最大离心力可至1000g）， 离心20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心 时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。加入血液样本后，样 本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。 3.剩余步骤同“情况A”中步骤 3至步骤 9。 【注意事项】 1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最 好在取血 2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后 分离效果更差甚至不能达到分离目的。 2.本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。 3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒 细胞数量增加。 4.吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。 5.如所实验后细胞得率或活性过低，请联系上海研谨生物以寻求技术支持