人外周血淋巴细胞分离液说明书.PDF

人外周血淋巴细胞分离液说明书 【产品名称】 通用名称：人外周血淋巴细胞分离液 产品名称：人外周血淋巴细胞分离液 英文名称：Human Lymphocyte Separation Medium 【包装规格】 100mL/瓶、250mL/瓶 【预期用途】 适用于从人外周抗凝全血中分离单个核细胞（主要为淋巴细胞），无菌条件下所分离的 细胞可用于免疫学检测。也可用于医学临床上从人外周血细胞、骨髓等组织液获取淋巴细胞。 【检测原理】 密度梯度沉降法是根据细胞密度差异，借助细胞分离液和离心，进行细胞分离纯化的常 用方法之一。细胞梯度密度分离液产生一定程度的密度梯度，将稀释后的全血铺层于分离液 之上。离心后，红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于 或等于分层液比重漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液 液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。 本产品将葡聚糖和泛影葡胺按照一定比例混合，调整密度、渗透压、pH 值，经过除菌 过滤后制成一种密度在 1.077g/mL 并且与外周全血等渗的溶液（分离液），经过密度梯度离 心，使一定密度的细胞按照相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 【检验方法】 1. 取新鲜抗凝全血，EDTA（枸橼酸钠或肝素）抗凝剂均可。用等体积 PBS或 0.9% NaCl 稀释全血。 2. 在离心管中加入一定体积的分离液，将稀释后的血样平铺到分离液液面上方，保持两液 面界面清晰。分离液、抗凝未经稀释全血、PBS（或生理盐水）体积为 1:1:1。 3. 室温，水平转子 700-800g（2000-2500rpm）离心 20-30min。 4. 离心结束后，管底是红细胞，中间层是分离液，最上层是血浆/组织匀浆层，血浆层与分 离液层之间是一层薄较致密的白膜，即：单个核细胞（包括淋巴细胞和单核细胞）层。 小心吸取白膜层到另一离心管中。 5. 用 PBS或 RPMI 1640稀释到一定体积，颠倒混匀。室温，水平转子 250g（1000rpm）， 离心 10min，弃上清。重复洗涤 1-2次。 6. 用 PBS或合适的培养基将淋巴细胞重悬备用。 【主要组成成分】 本品为略带黄色透明液体，主要组成成分是葡聚糖与泛影葡胺。 【储存条件及有效期】 未开封并且 4-30℃避光保存，有效期为 2年；开包装后保质 2周。 【适用仪器】 半径 15cm水平转子离心机。 【样本要求】 本分离液要求样本为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且储存、处理和运输过程中 避免冷冻和冷藏。 【检验结果的解释】 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效 果，用户可以调节离心转数和离心的时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自 定） 【检验方法的局限性】 本实验要求，在正常大气压下，样本、分离液及分离环境温度为(20±5)℃。 【注意事项】 1. 启封后应置 4℃保存，避免微生物的污染。 2. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升至室温时，摇匀后使用。 3. 整个分离过程中，温度应控制在（20±5）℃且无菌环境下进行，避免微生物的污染，否 则会影响分离质量。 4. 为保持淋巴细胞的活性，应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单个核细胞层， 包括淋巴细胞和单核细胞。 5. 分离时请严格按照比例，每一份淋巴细胞分离液加两份稀释后的血液。 【生产企业】 企业名称：深圳市达科为生物工程有限公司 地址：广东省深圳市南山区桃源街道光前工业区 20栋 4C 邮政编码：518055 电话号码：0755 传真号码：0755 网址： 邮箱：rd@ 【医疗器械生产企业登记号】粤深药监械登字 2012019号 【医疗器械注册证书编号】粤深药监械（准）字 2013第 1400046号 【产品标准编号】YZB/粤深 0046-2013 【说明书批准日期】2013年 6月 14日 【参考文献】 1. Boyum A. (1968): Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J. Clin. Lab. Invest. 21, Suppl. 97. 2. Harris R. Ukayiofo EV. (1969): Rapid preparation for lymphocytes for tissue typing. Lancet 327, 7615. 3. Boyum, A. (1968): Isolation and removal of lymph