22 病毒感染的检查方法与防治原则109教室.ppt

第25章 病毒感染的检查方法与防治原则;内 容;第一节 病毒感染的诊断 （Diagnosis of viral infection）;一、标本采集与送检原则;二、检查方法;1. 病毒形态学检查;呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片;Inclusion body;2. 病毒血清学检查;(1) 中和试验(Neutralization test) (2) 血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition test) (3) 免疫标记法(FIA、EIA、RIA) ⑷ 蛋白印迹(Western blot) ;Immunofluorescense test;Immunofluorescense test;HEL细胞中CMV IE1蛋白的表达;ELISA;AIDS的确诊试验;3. 病毒分子生物学检查;3. 病毒分子生物学检查;4. 病毒的分离培养与鉴定;病毒的分离培养方法：;⑴ 动物接种(animal inoculation);⑵ 鸡胚培养(embryonated egg culture);鸡胚接种部位：;优点： 易管理 不带微生物 成本较低 缺点： 操作程序复杂 目前用鸡胚培养的病毒主要是流感病毒 ;(3) 细胞培养(cell culture);根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: ? 原代培养细胞 ? 二倍体细胞株 ? 传代细胞系或株;①原代培养细胞（primary cultural cells);①原代培养细胞（primary cultural cells);特点: ? 对多种病毒敏感 ? 生长能力有限, 获取成本高 ? 可携带潜伏病毒 应用: ? 病毒分离与鉴定 ? 病毒学实验研究 ? 不能用于制备疫苗;体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞;;4. 病毒的分离培养与鉴定;病毒鉴定：;⑴ 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE);①CPE：病毒感染细胞发生形态改变;Syncytium formation in cell culture caused by RSV (top), and measles virus (bottom). ;③CPE：形成包涵体（inclusion body）;Syncytial formation caused by mumps virus and haemadsorption of erythrocytes onto the surface of the cell sheet. ;⑶ 干扰现象（interference）;4. 病毒的分离培养与鉴定; 病毒数量及感染性测定：;蚀(空)斑形成试验（plaque assay） ;PLAQUE ASSAY;PLAQUE ASSAY;PLAQUE ASSAY; 分别为10-1、10-2、10-3倍稀释度的HCMV病毒液感染的HEL细胞;用途： ? 测定感染性病毒量 单位: PFU (plaque forming unit)/ml 由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一个空斑称为空斑形成单位。 ? 分纯病毒;50%组织细胞感染量(50% tissue culture infectious dose, TCID50); 分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍稀释度的HCMV感染的HEL细胞;香港大??专家：患者鼻咽标本→Vero细胞培养→CPE →EM观察：冠状病毒 随后加拿大和美国CDC等SARS国际协作组的多个实验室也培养出了冠状病毒 利用‘免疫荧光法’将分离病毒与SARS患者血清进行血清学检测，反应呈阳性 从冠状病毒基因组的保守区设计引物，采用RT-PCR方法从培养上清中扩增出了冠状病毒基因→测序→经Genbank数据库同源性比对，发现同源性为64%左右;加拿大专家完成了全基因组测序→发现与已知人和动物的冠状病毒的同源性差异较大→确定为一种新的冠状病毒。 荷兰的病毒学家：用这种冠状病毒感染猴子→出现了与SARS病人相同的临床表现和病理特征→再次从动物学实验证实引起SARS的病原体是这种冠状病毒 WHO将其命名为SARS冠状病毒;电镜;1. 名词解释: cytopathic effect（CPE） hemadsorption（Had） plaque assay， TCID50 2. 分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？ 3. 常用的分离培养病毒的方法有哪些？各有何应用？ 4. 病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？ 5. 病毒性感染的快速诊断方法有哪些？