第章病毒感染的检查方法与防治原则.ppt

病毒感染的检测方法与防治原则 病毒分离培养和鉴定 快速诊断 形态学检查 病毒成分检测 抗体检测 一、标本的采集与送检 早期取材：病程初期或急性期采集。 无菌操作，正确处理含菌标本：带有杂菌的标本用于病毒分离培养，应使用抗生素（“双抗”或两性霉素B）以抑制标本中的细菌或真菌等生长繁殖。 低温保存，尽快送检。长时间保存加入甘油或二甲基亚砜-70℃冻存。 血清学诊断：应取发病初期和恢复期双份血清，检测抗体效价的动态变化。 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚培养（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation） 1.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒 2.鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 3.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line） 特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 部分病毒在敏感细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应。 常见的细胞病变： ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； ②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； ③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 （2）红细胞吸附及吸附抑制试验 正粘病毒、副粘病毒等感染的细胞膜上产生血凝素，使之能吸附鸡、豚鼠或猴红细胞。 可被相应的病毒特异性抗体抑制，称红细胞吸附抑制试验。 3.红细胞凝集试验 病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验） 将病毒悬液作不同稀释度，以血凝反应的最高稀释度作为血凝效价，可定量检测病毒颗粒的含量。 4.中和试验（neutralizing test，NT） 病毒＋中和抗体 病毒失去感染性 病毒的分离培养与鉴定适用于以下情况： ①病程长且诊断困难者，疑似病毒感染，但针对病毒的检测结果均为阴性，进行病毒分离对诊治有指导意义； ②疑为新现病毒感染货已被消灭的病毒病“死灰复燃”； ③为鉴别不同病毒所致具有相同症状的疾病，以明确何种病毒感染； ④对所用的减毒活疫苗监测恢复毒力突变株的出现； ⑤用于病毒生物学性状的研究或流行病学调查等。 新病毒需进一步鉴定 核酸类型的测定： 用RNA酶及DNA酶鉴定5-溴-2-脱氧尿苷(BUDR)抑制DNA病毒复制 理化性状的检测：大小、结构、衣壳对称类型、有无包膜等 基因测序和生物对比等 电镜和免疫电镜检查：病毒颗粒 光学显微镜检查：包涵体 （二）病毒成分检测 1.病毒蛋白抗原检测 操作简单、特异性强、 敏感性高 免疫标记技术：酶免疫、免疫荧光 蛋白印迹技术：具有确诊意义 2.病毒核酸检测 核酸电泳 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序技术 核酸扩增技术----聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)   特异保守片段作为靶基因---诊断病毒性感染。 病毒基因的易变区，结合RFLP，测序等技术---对病毒进行分型和突变的研究。 实时荧光定量PCR（real-time PCR) （三）早期抗体检测 可辅助诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇