响应面法优化微波提取柚皮总黄酮工艺论文.doc

响应面法优化总黄酮工艺1 实验材料与方法 1.1 实验材料： 芦丁（中国药品生物制品检定所提供）；均为优级纯；二次蒸馏水 1. 主要仪器设备： FA2004型电子天平（上海精科）； 722-1 型电热恒温干燥箱（湖北省黄石市医疗器械厂）； HK-04A200 g手提式粉碎机（广州旭朗机械设备）； WD900ASL23-2 型微波炉（格兰仕）； SHZ-III 循环水多用真空泵（上海亚荣生化仪器厂）； 722型可见分光光度计 1.1.3.1 实验材料的预处理→洗净→切片→50 ℃干燥→→粉碎过40目筛→制得粉1.3.2 芦丁标准—0.0045，相关系数R=0.9980. 1.3.4 微波法提取总黄酮的方法称取1.00 g粉于锥形瓶中，加入0%乙醇溶液3 mL，在下微波处理6 min (每次加热2min，放置1 min，累计达6 min) ，过滤，定容至100 mL在510 nm处测定吸光度，计算总黄酮得率。1.3.5 总黄酮类物质的测定按以上方法用提取液代替芦丁实验，利用回归方程进行计算即可。 　 　 X =m1V2D／m ×100 % 式中 X———样品中总黄酮含量，mg／mL； 　　　 m1———根据标准曲线计算出待测液中黄酮的量，mg； 　　 　 m ———样品质量g； 　　　 D ———样品的总稀释倍数； V2 ———样品提取液总体积，mL。 2 结果与讨论 2.1微波法提取总黄酮工艺条件单因素试验设计.1.1 乙醇浓度对总黄酮提取效果影响 称取5份1. 00 g粉分别置于锥形瓶中，在料液比固定在1:、提取时间为5min的条件下，分别对粉按以下不同乙醇浓度0%、0%、70%、90%进行微波提取，布氏抽滤，滤渣以同样的条件提取、抽滤，合并滤液，然后用相应浓度的乙醇水溶液定容至mL，按照制作标准曲线的方法得出中总黄酮的提取率，结果见图1。 图1 乙醇浓度对总黄酮提取率的影响由图1可知，随着乙醇浓度的增加，总黄酮的提取率也在升高，在乙醇浓度为0%时达到最大值，但当乙醇浓度继续增大时，提取率下降，因此乙醇浓为0%左右为宜。.1.2 料液比对总黄酮提取效果的影响称取份1.00 g粉分别置于锥形瓶中,在乙醇浓度固定在%、提取时间为min，解冻档的条件下，分别对粉按以下不同料液比20、1:、1:、1:进行微波提取，方法同上，得出总黄酮提取率，结果见图2。图2 料液比对总黄酮提取率的影响由图2可以看出，在液料比为1:到1: 增加的过程中，总黄酮的得率随液料比的增大升高，液料比1:是达到最大，随后提取率下降，因此选取1:较为合适。 .1.3 提取时间对总黄酮提取效果的影响称取5份1.00 g粉分别置于锥形瓶中, 在乙醇浓度固定在80%、料液比为1:的条件下，分别对粉按以下不同提取时间、4、、、min进行微波提取，方法同上，得出总黄酮提取率，结果见图3。 图3 提取时间对总黄酮提取率的影响由图3 可以看出, 开始时总黄酮得率随提取时间的延长而升高,当提取时间达到min时，总黄酮得率达到最高，之后随时间继续延长，总黄酮得率不再提高反而略有下降，因此选择提取时间为min为宜。2.2 中心验设计与响应面分析 采用软件Design-Expert 8.0中的Box-Behnken试验设计原理[1]，在乙醇浓度、料液比、提取时间3个因素对总黄酮提取率的研究的基础上，综合单因素试验结果，采用响应面分析法在3因素3水平上，以乙醇浓度、料液比、提取时间3个因素为自变量，总黄酮提取率为响应值进行优化，以达到最大限度提取总黄酮的目的。试验因素与水平设计表见表1，响应面试验方案及结果见表2。水平因素%(A) 料液比( g :m)(B) 提取时间min(C) -1 70 1:30 5 0 80 1:35 6 1 90 1:40 7 表2 Box-Behnken中心组合设计方案及实验结果实验号 A:乙醇浓度% B:料液比 C:提取时间min Y:总黄酮得率1 -1.00 1.00 0.00 0.364 2 1.00 1.00 0.00 0.3653 1.00 0.00 1.00 0.4394 0.00 0.00 0.00 0.5785 0.00 0.00 0.00 0.577 6 0.00 0.00 0.00 0.5757 1.00 0.00 -1.00 0.4348 -1.00 -1.00 0.00 0.3689 1.00 -1.00 0.00 0.37210 0.00 -1.00 -1.00 0.45111 -1.00 0.00 1.00 0.43212 0.00 0.00 0.00 0.57413 -1.00 0.00 -1.00 0.43614 0.00 1.