实验4. 酶的特异性.ppt

实验四 酶的特异性 【实验目的】 学习酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。 【器材及试剂】 （一）器材： 1. 恒温水浴锅 2. 试管及试管架 3. 离心机 4. 吸量管 5.烧杯、量筒 、漏斗等 （二）试剂： 1. 2%蔗糖 2. 1%淀粉（内含0.3%的NaCl） 3. 唾液淀粉酶溶液 4. 蔗糖酶溶液 5. Benedict试剂 (二) 蔗糖酶的特异性 【注意事项】 唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是50～300倍。 【思考题】 1、 若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min，实验结 果会发生什么样的变化？ 2、 酶作用的专一性有哪几种？ * * 生物化学实验之－－ 山东师范大学生命科学学院 【实验原理】 酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有严格的选择性，即酶的特异性。 淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。 Benedict试剂（含有Cu 2+）常用于检验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的Cu2O沉淀。 【实验步骤】 （一）淀粉酶的特异性 1.唾液淀粉酶溶液的制备： 先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管1支， 取唾液（无泡沫）约2ml，蒸馏水20倍稀释， 备用。 2.取试管5支，标号，按下表所列的次序操作： 1.0 — — 1.0 1.0 蒸馏水（ml） 1.0 1.0 1.0 — — 唾液淀粉酶（ml） — 1.0 — 1.0 — 2%蔗糖溶液（ml） — — 1.0 — 1.0 1%淀粉溶液（ml） 5 4 3 2 1 试管编号 试剂 3. 摇匀，置37℃恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。 1. 蔗糖酶溶液的制备： 取活性干酵母1.0g，置于研钵中，加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min，再加蒸馏水至总体积约为20ml，过滤或离心，滤液或上清液备用。 2. 取试管5支，标号，按下表所列的次序操作： 1.0 — — 1.0 1.0 蒸馏水（ml） 1.0 1.0 1.0 — — 蔗糖酶（ml） — 1.0 — 1.0 — 2%蔗糖溶液（ml） — — 1.0 — 1.0 1%淀粉溶液（ml） 5 4 3 2 1 试管编号 试剂 3. 摇匀， 置37℃恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂2ml，再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。 移液枪的使用 部分用具与试剂 量程的调节 1.按照从大体积调为小体积的方法调节。 2.用拇指和食指旋转取液器上的旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的数字。 注意：千万不要将旋钮旋出最大量程，否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪。 微量移液器的使用方法 枪头（吸液嘴）的装配 在将枪头（pipette tips）套上移液枪时，正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。