实验三 发酵液中氨基氮的测定.doc

实验三 发酵液中氨基氮的测定 1、实验原理 氨基酸中的-NH3+基的pk值常在9.0以上，不能用一般的酸碱指示剂（包括酚酞），以氢氧化钠溶液作滴定测量。但可以用甲醛滴定法测量。在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中氨基相互作用，使滴定终点移至pH9.0左右，在该过程中指示剂酚酞不与甲醛作用。pH9.0正是酚酞的变色范围，因此，可以用酚酞作为指示剂，以氢氧化钠溶液来滴定-NH3+基上的H+，每释放一个氢离子，就相当于一个氨基酸。 R-NH3+ H++R-NH2 R-NH2+2CH3CHO R-N CH2OH 2 2、实验材料 试剂：1mol/LHCl溶液，标准NaOH溶液，12％中性甲醛，甲基红指示剂，酚酞指示剂 样品：侧孢芽孢杆菌发酵液 仪器：高速离心机、分析天平、碱式滴定管 3、发酵液中氨基氮的测定 （1）将发酵液过滤，取滤液2.5ml于 250ml三角瓶中，加蒸馏水约50ml,加甲基红指示剂2~3滴，加1mol/LHCl溶液1～2滴，使成红色，放置3min. （2）以标准NaOH溶液滴定至刚好转橙黄色，读取此时滴定管刻度，加入12％中性甲醛10ml，放置5—10分钟。 （3）加入酚酞指示剂1ml，用标准NaOH溶液滴定至呈微红色为终点，读取此时滴定管刻度。两次读数之差即为所耗NaOH毫升数。 （4）计算： NNaOH×VNaOH × 14.01 NH-N% × 100 mg/100ml 2.5