第十四章胚胎技术.ppt

3、克隆与无性繁殖：?? （1）无性繁殖:是指不经过雌雄两性生殖细胞的结合,只由一个生物体产生后代的生殖方式。 （2）克隆:在动物上主要指通过核移植培育出遗传特征完全相同的新个体，在植物上进行的基因操作也称克隆。 因此，克隆是无性繁殖，但无性繁殖不一定是克隆。 胚胎克隆：使用的核供体细胞如果来自多细胞阶 段的胚胎，叫做胚胎克隆。 体细胞克隆：使用的核供体细胞来自动物体细胞?? 叫做体细胞克隆。 4、理论基础 体细胞具有细胞全能性 5、发展历程?? （1）胚胎细胞核移植 年代 代表人物 动物 1952 Briggs和Kings 非洲豹蛙 1975 Bromhall 家兔 1981 Illmense和Hoppe 小鼠 1986 Willadsen 绵羊 1987 Prather 牛 1988 Stice和Robl 家兔 1989 Prather等 猪 1991 Yong等 山羊 6、动物克隆技术的意义（主要分胚胎克隆和体细胞克隆） （1）培育优良畜种，扩大良种种群； （2）制备转基因克隆动物，?进行生物药物生产； （3）开展异种动物克隆，拯救濒危动物； （4）与干细胞技术结合，开展治疗性克隆； （5）利用核移植技术，研究生物学的基本问题，如动物个体发生的核质互作关系、细胞核的去分化和重新编程问题等。 （一）胚胎克隆 1、胚胎克隆的操作程序 （1）卵母细胞的去核：细管吸除法，紫外线照射法。 （2）供体核的准备和移植：将供体胚胎分成单个卵裂球，每个卵裂球即为供体核。 （3）卵裂球与卵子的融合：将卵裂球和去核卵子融为一体，形成单细胞结构。 （4）卵子的激活：在正常受精过程中，精子穿过透明带及卵黄膜时，引起卵子内钙离子浓度升高，卵子细胞周期恢复，启动胚胎发育，这一现象称为激活。胚胎克隆时，通常用一定强度的电脉冲作用卵母细胞。 （5）克隆胚胎的培养 2、胚胎克隆技术存在的问题：总体效率低 （1）供体核数量的局限性：目前，胚胎克隆供体核的最高发育阶段是绵羊的内细胞团细胞，而其他家畜必须用64-细胞或更早阶段胚胎作核供体，才能获得克隆后代。 （2）受体卵子质量的影响： （3）核质关系的影响：细胞核和细胞质关系不协调是导致核移植效率低的一个重要因素。 （4）操作技术的影响 3、胚胎克隆技术的发展远景 胚胎克隆与胚胎分割、卵裂球培养相比，大大提高了生产遗传同质动物的效率。 （1）在研究动物个体的发生发育过程中，胚胎细胞核移植为探索细胞质与细胞核的相互作用和胚胎细胞的分化规律方面提供了很好的研究手段。 （2）胚胎克隆技术的完善为体细胞克隆技术发展将提供有益的借鉴，在体细胞克隆没有成功的动物中，胚胎克隆依然是理想的无性繁殖技术。 3、胚胎克隆技术的发展远景 胚胎克隆与胚胎分割、卵裂球培养相比，大大提高了生产遗传同质动物的效率。 （1）在研究动物个体的发生发育过程中，胚胎细胞核移植为探索细胞质与细胞核的相互作用和胚胎细胞的分化规律方面提供了很好的研究手段。 （2）胚胎克隆技术的完善为体细胞克隆技术发展将提供有益的借鉴，在体细胞克隆没有成功的动物中，胚胎克隆依然是理想的无性繁殖技术。 4、胚胎分割的意义 胚胎分割技术可以使胚胎移植的胚胎数目成倍增加，产生遗传性状相同的后代，因此是一种广义上的克隆技术，这对畜牧业和实验研究有重要意义。此外，应用胚胎分割技术还可以控制性别。 5、胚胎融合的意义 （1）可以作为研究分析哺乳动物发生机制的重要手段，例如研究卵裂球分化潜力、性分化机制与性比、胚胎细胞基因表达的机制； （2）可以对生理功能分析的应用，例如对免疫功能、遗传病的研究分析； （3）可以培育杂种个体，甚至是种间杂种； （4）可以通过制作各种组合的嵌合体，培育新的毛皮动物； （5）利用种间移植，分析胎儿与母体的相互关系。 （二）体细胞克隆 1、体细胞核移植技术又称体细胞克隆，它是把分化程度较高的体细胞移入去核卵子中，构建新合子的生物技术。 它与胚胎克隆技术相比，有两大优点： 第一，同一遗传性状供体核的数量可无限获得； 第二，可通过对供体细胞的改造，加速家畜品种改良或生产转基因动物。 2、体细胞克隆技术的关键环节 体细胞克隆的主要技术程序与胚胎细胞基本克隆相同，主要差别在供体细胞的选择。 随着克隆技术的发展和人们对核质关系认识的深入，自然状态的G0期细胞（如卵丘细胞）和G1期细胞（胎儿成纤维细胞），可直接移入去核卵母细胞中生产克隆胚胎，并且已在小鼠和牛上获得成功。 3、体细胞克隆技术目前存在的问题 （1）结果不稳