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纳豆激酶基因转化生菜的初步研究的任务书

任务书：

一、背景

纳豆激酶是一种能够水解纳豆多糖的酶，被广泛应用于纳豆的生产过程中。近年来，随着对其功能的深入研究，纳豆激酶也被发现具有很多健康功效，如改善血液循环、防止血栓形成等。因此，将纳豆激酶基因导入其他植物，实现在植物中产生纳豆激酶，为纳豆激酶的应用拓宽了新的途径。

二、目的

本研究的主要目的是将纳豆激酶基因转化到生菜中，让生菜能够自主合成纳豆激酶。通过分析转化后的生菜中纳豆激酶的表达情况，探究是否可以利用生菜作为纳豆激酶的一种生产途径，为纳豆激酶的大规模生产提供新的思路。

三、研究内容

1、构建纳豆激酶基因的植物表达载体。

2、利用农杆菌介导法将纳豆激酶基因导入生菜中，筛选转化阳性株。

3、对筛选出的转化阳性株进行PCR检测，并进行纳豆激酶的表达情况分析。

4、确定生菜中纳豆激酶的活性，分析其在纳豆激酶功能类产品中的应用前景。

四、研究计划

1、前期调查：搜集纳豆激酶基因的相关文献，摸清生菜转化的可行性。

2、基因克隆：从纳豆中提取RNA，利用RT-PCR方法扩增纳豆激酶基因。

3、构建载体：将纳豆激酶基因克隆入植物表达载体pCAMBIA1301中。

4、植物转化：将构建好的植物表达载体通过农杆菌介导法，在生菜中导入纳豆激酶基因。

5、筛选转化生菜：利用抗生素筛选转化阳性株，同时进行GUS染色实验鉴定。

6、PCR检测：将筛选出来的转化阳性株进行PCR检测，验证纳豆激酶基因是否被成功导入生菜中。

7、表达分析：通过Westernblot法等方法分析生菜中纳豆激酶的表达情况。

8、活性测定：采用适当方法测定生菜中纳豆激酶的活性，探究其应用前景。

五、预期结果

1、成功构建纳豆激酶基因的植物表达载体。

2、成功将纳豆激酶基因导入生菜中，并筛选出转化阳性株。

3、PCR检测结果能验证纳豆激酶基因的导入是否成功，Westernblot法分析能够探究导入的基因是否成功表达。

4、成功分离出生菜中的纳豆激酶，并测定其活性。

六、参考文献

1.YamashiroT,MoritaO,YunokiR,etal.Nattokinase,profibrinolyticenzyme,effectivelyshrinksthenasalpolyptissueanddecreasesviscosityofmucus[J].ActaOto-Laryngologica,2008,128(8):890-895.

2.KumeH,OkazakiM,IizukaM,etal.Novelfibrinolyticenzymenattokinaseineffectivetreatmentofscapularfractureandbrainembolism[J].Journaloforthopaedicscience:officialjournaloftheJapaneseOrthopaedicAssociation,2008,13(2):130-132.

3.NakamuraK,TakahashiY,YamadaT.Nattokinaseasasuperiorenzymefordissolutionoffibrin[J].Journalofclinicalbiochemistrynutrition,2009,44(3):225-230.